[發(fā)明專利]一種重組人3型腺病毒及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310043853.9
• 申請(qǐng)日: 2013-02-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103966174B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周榮;田新貴;蘇曉波;薛春燕;鐘南山
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院;廣州呼吸疾病研究所
• 主分類號(hào): C12N7/01
• 分類號(hào): C12N7/01;C12N7/04;A61K39/235;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)海心聯(lián)合專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44295
• 代理人: 王洪娟

本發(fā)明公開(kāi)了一種以人3型腺病毒(HAdv3)為載體的人3型、7型腺病毒雙價(jià)疫苗候選株及其制備方法。人3型腺病毒(HAdv3)衣殼中包含HAdv3六鄰體和HAdv7六鄰體兩種六鄰體。在人3型腺病毒基因組E3區(qū)插入了HAdv7六鄰體蛋白表達(dá)框，在體外細(xì)胞中拯救包裝得到一種六鄰體嵌合型的重組腺病毒，其衣殼中包含HAdv3六鄰體和HAdv7六鄰體兩種六鄰體。該疫苗候選株滅活或不滅活都可以誘導(dǎo)出同時(shí)抗HAdv3和抗HAdv7的中和作用抗體，利用該疫苗候選株可制備預(yù)防HAdv3和HAdv7感染的雙價(jià)疫苗。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于重組病毒基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種以人3型腺病毒(HAdv3)為載體的人3型、7型腺病毒雙價(jià)疫苗候選株及其制備方法。

背景技術(shù)

人腺病毒(Adenovirus)是1953年從急性呼吸道疾病病人身上分離、鑒定出來(lái)的，是一類主要感染人呼吸道和消化道的病原體。到目前為止，人類已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了6個(gè)種屬52種不同血清型的腺病毒；其中約有1/3能引起如急性呼吸道感染、流行性角膜炎、急性出血性結(jié)膜炎、咽結(jié)膜炎、急性咽炎、膀胱炎、嬰幼兒致死性肺炎等疾病；患者主要是嬰幼兒及體弱人群。在我國(guó)，5歲以下兒童急性呼吸道疾病中約有5％是由腺病毒引起的；其中，腺病毒引起的肺炎尤為嚴(yán)重，是嬰幼兒肺炎發(fā)病率中僅次于呼吸道合胞病毒肺炎的一種病毒性肺炎；嚴(yán)重的腺病毒肺炎不僅可以引起心力衰竭、呼吸衰竭，還可以引起肺外受累，如腦炎、肝損害、心肌炎或心肌損害等，甚至導(dǎo)致死亡。腺病毒流行范圍廣，傳播速度快，近年來(lái)在多個(gè)國(guó)家和地區(qū)爆發(fā)和流行，給人們的公共衛(wèi)生安全帶來(lái)了極大的威脅。在我國(guó)，3型和7型腺病毒是引起嚴(yán)重呼吸道感染的主要的兩種腺病毒。

腺病毒致病的廣泛性和危害的嚴(yán)重性使得腺病毒的防治顯得十分重要，接種腺病毒疫苗是預(yù)防腺病毒感染最有效的方法之一。但由于腺病毒產(chǎn)生的中和抗體只能中和同型腺病毒的感染，不同型別腺病毒抗體之間無(wú)交叉保護(hù)作用。在我國(guó)，腺病毒疫苗的臨床使用還是一片空白。從我國(guó)近年來(lái)多次爆發(fā)腺病毒疫情來(lái)看，自主研發(fā)腺病毒疫苗十分必要。若研制出一種能同時(shí)預(yù)防幾種型別的腺病毒感染的疫苗對(duì)于降低腺病毒感染率將非常有價(jià)值。而不同型別腺病毒簡(jiǎn)單混合的多價(jià)疫苗可能體內(nèi)重組產(chǎn)生高致病的病毒而受到限制。

腺病毒顆粒是一個(gè)二十面體的對(duì)稱結(jié)構(gòu)，殼體由12個(gè)位于頂角的五鄰體基座和纖維蛋白，240個(gè)非頂角顆粒的六鄰體(hexon)以及結(jié)構(gòu)輔助蛋白多肽構(gòu)成。六鄰體是三聚體結(jié)構(gòu)，包括是腺病毒顆粒中最豐富的免疫原，是腺病毒最主要的誘導(dǎo)中和性抗體的抗原。不同型別腺病毒的六鄰體蛋白的氨基酸序列有高達(dá)78-95％的同源性，其區(qū)別主要集中在7個(gè)高變區(qū)(HVRs)，這些高變區(qū)暴露于病毒殼體表面，不涉及六鄰體單體間的相互作用，也不與其它的腺病毒蛋白相互作用。人3型腺病毒和人7型腺病毒六鄰體間相似性高達(dá)95％，其區(qū)別僅存在于5個(gè)表面暴露區(qū)。

發(fā)明內(nèi)容

為克服上述技術(shù)缺陷，本發(fā)明提供一種重組人3型腺病毒及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明的一種重組人3型腺病毒由嵌合型人3型腺病毒衣殼和重組人3型腺病毒基因組構(gòu)成，所述HAdv7六鄰體蛋白表達(dá)框插入位點(diǎn)為所述人3型腺病毒的基因組E3區(qū)，所述重組人3型腺病毒嵌合型衣殼中包括HAdv3和HAdv7兩種型別的六鄰體。

本發(fā)明還提供一種衣殼嵌合型重組人3型腺病毒顆粒，其特征在于，病毒顆粒衣殼中包括HAdv3和HAdv7兩種型別的六鄰體。

本發(fā)明還提供了一種人3型腺病毒-人7型腺病毒的雙價(jià)疫苗候選株，所述雙價(jià)疫苗候選株含有上述重組人3型腺病毒。

本發(fā)明還提供了一種制備上述重組人3型腺病毒的方法，包括如下步驟：

將HAdv7六鄰體蛋白全基因、CMV啟動(dòng)子和SV40polyA插入重組人3型腺病毒基因組中，所述插入?yún)^(qū)為E3區(qū)。