[發明專利]乙型腦炎病毒包膜蛋白結合肽的結構與用途

有效

• 申請號: 201310039518.1
• 申請日: 2013-02-01
• 公開（公告）號: CN103965292B
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 王升啟;楊靜;張莉;丁曉然;汪崇文;何麗娜
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;A61K47/62;A61P31/14
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本發明涉及一類特異性結合乙腦病毒包膜蛋白的多肽序列、結構及其在抗乙腦病毒藥物靶向修飾技術中的應用，屬于生物醫藥技術領域。本發明利用噬菌體展示技術篩選隨機肽庫，得到具有編號1?11序列的與包膜蛋白特異結合的多肽。本發明又通過對噬菌體肽庫中篩選出的包膜蛋白結合肽進行了與乙腦病毒結合活性和腦組織靶向性的研究，結果發現一條與乙腦病毒特異結合活性好且具有乙腦病毒感染介導的腦組織靶向性的多肽P63，其序列為NH₂?HHWWVPSWSRWT?COOH。因此，本發明涉及的包膜蛋白結合肽及其中病毒特異性腦靶向肽P63有望用于抗乙腦病毒藥物的靶向修飾技術中。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，涉及藥物遞送系統，更具體地說涉及一類與乙腦病毒包膜蛋白特異性結合的多肽的序列、結構及其在抗乙型腦炎病毒藥物的靶向修飾技術中的用途。

背景技術

日本乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)是黃病毒科黃病毒屬的成員之一，具有嗜神經性，其引起的日本乙型腦炎是一種嚴重危害人畜健康的蟲媒病毒性疾病。疫苗接種是控制乙腦的可靠方法，目前對乙腦尚無特異性療法，主要是支持療法和對癥治療。乙腦病毒為單股正鏈RNA病毒，RNA全長11kb，含有一個開放的讀碼框架，編碼一個多聚蛋白。在感染細胞中，這種多聚蛋白至少被分割成11種蛋白，病毒的結構蛋白有5’端讀碼區的前1/3編碼，包括核衣殼蛋白C，膜蛋白M，包膜蛋白E。非結構蛋白NS由余下的讀碼框編碼。該開放讀碼框編碼一個聚蛋白，可裂解加工成3個結構蛋白(C，PrM，E)和7個非結構蛋白(NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A，NS4B，NS5)。乙腦病毒的包膜蛋白E是主要的結構蛋白，約53KD，該蛋白在大多數黃病毒中是保守的，它是毒粒表面的重要成份，具有神經毒性和神經侵襲性的致病位點，可作為膜融合蛋白，使病毒進入神經細胞。E蛋白還具有誘生血凝抑制抗體，補體結合抗體，中和抗體的功能，可引發宿主產生保護性的免疫應答，與特異性受體結合可粘附在細胞表膜。因此，包膜蛋白E可成為抗乙腦病毒藥物的潛在靶點。

目前藥物的靶向轉運研究眾多的是選取各類細胞表面特異性受體的配體作為靶分子，而通過病毒表面蛋白的特異性結合配體將藥物特異性導入病毒感染細胞的靶向轉運方式尚未發現有報道，因此我們提出了一種全新的基于病毒顆粒介導的藥物靶向轉運機制的理論。

由于乙腦病毒的神經嗜性，當乙腦病毒感染后，病理變化主要發生在腦，對其他組織影響較小，因此，特異性結合乙腦病毒包膜蛋白的多肽與乙腦病毒結合后也會有腦組織靶向性，因此將腦組織靶向肽與抗乙腦病毒藥物進行偶聯，可以達到藥物靶向遞送的特點。

噬菌體展示技術(phage display technique，PDT)是尋找與靶蛋白有結合關系的多肽或蛋白的強效工具，它的最大優點是直接將可呈現的表現型和其基因型聯系在一起，利用其配體的特異性親和力，將所感興趣的蛋白質或多肽篩選出來。目前，噬菌體展示技術可對含有數十億克隆的肽庫進行快速的高通量篩選，它已經成為多肽藥物研究的有力工具。該技術可從肽庫內篩選與宿主細胞受體結合的多肽或能與病毒膜蛋白等活性位點結合的多肽。

因此，我們選擇乙腦病毒的包膜蛋白E作為靶分子，應用噬菌體展示技術篩選乙腦病毒表面包膜蛋白E特異性結合的多肽，經過驗證得到與乙腦病毒有較高親和性、靶向病毒感染腦組織的靶向肽，通過化學合成等手段將多肽與抗乙腦病毒藥物進行連接，借助多肽與病毒表面 蛋白的結合，在病毒入胞過程中將抗病毒藥物攜帶進入細胞從而增加攝取率，腦組織靶向性，提高藥物的抗病毒活性。

發明內容：

本發明的目的在于通過篩選提供一類與乙腦病毒包膜蛋白親和性高的多肽及其在抗病毒藥物的靶向修飾技術中的應用。

本發明提供一類能與乙腦病毒包膜蛋白特異性結合的多肽，該類多肽含有12氨基酸殘基。

本發明提供的乙腦病毒包膜蛋白結合多肽的氨基酸序列示于表1中。

表1包膜蛋白結合多肽的氨基酸序列