[發明專利]表達副豬嗜血桿菌表面抗原的豬霍亂沙門氏菌減毒疫苗

有效

• 申請號: 201310039113.8
• 申請日: 2013-01-31
• 公開（公告）號: CN103421732A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 金梅林;趙建平;周明光;宋岱松;張強;張安定;石建;康超;徐高原;陳煥春
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;A61K39/116;A61K39/112;A61K39/102;A61P31/04;C12R1/42;C12R1/21
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

1.一株表達副豬嗜血桿菌表面抗原HbpB基因的重組豬霍亂沙門氏菌菌株asd^-C500/pYA-HbpB，Salmonella?choleraesuis?asd^-?C500/pYA-HbpB，保藏在中國典型培養物保藏中心，其保藏號為CCTCC?NO：M2013052。

2.如權利要求1所述的豬霍亂沙門氏菌菌株asd^-?C500/pYA-HbpB，其特征包括如下特征：

1)所述菌株基因組缺失了豬霍亂沙門氏菌細胞壁合成必需的asd基因；

2)所述菌株內含表達副豬嗜血桿菌表面抗原HbpB基因的重組質粒pYA-HbpB，所述的質粒能夠復制表達asd基因。

3.一種無抗性標記的重組質粒pYA-Hbp?B，其特征在于，所述的重組質粒含有副豬嗜血桿菌表面抗原Hbp?B基因，且能在宿主菌內表達，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

4.一種無抗性標記的重組質粒pYA-HbpB，其蛋白質的序列如SEQ?ID?NO：2所示。

5.一種表達副豬嗜血桿菌表面抗原基因HbpB的重組豬霍亂沙門氏菌的制備方法，其包括如下步驟：

1)構建豬霍亂沙門氏菌C500菌株asd基因缺失株asd^-C500；

2)設計引物對，通過PCR擴增方法得到副豬嗜血桿菌表面抗原HbpB基因片段，該基因片段的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示；

3)將步驟2)中擴增的基因片段HbpB插入到原核表達載體pYA3493的BamH?I和HindIII位點之間，得到表達質粒pYA-HbpB；

4)將步驟3)獲得的表達質粒pYA-HbpB電轉化至宿主菌株豬霍亂沙門氏菌asd^-C500，篩選得到表達副豬嗜血桿菌表面抗原HbpB的豬霍亂沙門氏菌株asd^-C500/pYA-HbpB，Salmonella?choleraesuis?asd^-C500/pYA-HbpB，其保藏號為CCTCC?NO：M2013052；

其中：

步驟2)所述的引物對的DNA序列如下所示：

上游引物：cgtggatcc?gccaataccagattcaggaacattgaac，

下游引物：ggc?aagctt?ttaaaatgttttaattgcagataaccaaaa。

6.權利要求1所述的重組豬霍亂沙門氏菌在制備豬霍亂沙門氏菌-副豬嗜血桿菌二聯基因工程疫苗中的應用。

7.權利要求3或4所述的pYA-HbpB重組質粒在制備豬霍亂沙門氏菌-副豬嗜血桿菌二聯基因工程疫苗中的應用。