[發(fā)明專利]一種用于秈粳亞種廣親和育性位點片段聚合的分子標(biāo)記引物組合及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310037291.7
• 申請日: 2013-01-30
• 公開（公告）號: CN103103279A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 萬建民;趙志剛;江玲;王益華;劉裕強;陳亮明;劉世家;劉喜;陳賽華;張文偉
• 申請（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;傅婷婷

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子遺傳學(xué)領(lǐng)域，提供了一種用于秈粳亞種廣親和育性位點片段聚合的分子標(biāo)記引物組合及其應(yīng)用。?

背景技術(shù)

近年來，隨著我國人口數(shù)量的不斷增加，以及耕地面積有限的情況下，提高水稻單產(chǎn)對保障國家糧食安全具有重要意義，而秈粳雜種優(yōu)勢的利用是提高水稻單產(chǎn)的重要途徑。但秈粳亞種間雜種F1通常表現(xiàn)部分不育，從而限制其強大雜種優(yōu)勢在生產(chǎn)上的有效利用。廣親和基因S5-n的發(fā)現(xiàn)為克服秈粳亞種間育性障礙提供了途徑(Japan.J.Breed.,1984,34:304-312)。目前，廣親和基因S5-n被廣泛應(yīng)用于水稻秈粳雜種優(yōu)勢利用中(Sci?Agric?Sin1992,23:1-6)。隨著育種親本范圍的擴大，研究者們發(fā)現(xiàn)，某些雜交組合盡管親本之一為攜帶S5-n的廣親和品種，但其雜種F1仍出現(xiàn)半不育現(xiàn)象（Japan?J?Breed1993,43:507–516），因此僅靠廣親和基因S5-n并不能完全解決秈粳亞種間的雜種半不育性問題。在育種實踐中，隨著雜種育性鑒定范圍的擴大，鑒定出了S7(Japan?J?Breed1992,42:793–801)、S8(Japan?J?Breed1993,43:507–516)、S9(Theor?Appl?Genet,1996,92:183-190)、S15(Theor?Appl?Genet,1996,92:183-190)、S16(Breeding?Science1995,45:161-170)、S17(Breeding?Science1995,45(2):191-195)、S29(Plant?Breeding,2005,124:440-445)、S30(Breed?Science,2005,55:409-414)、S31(Euphytica,2006,151:331-337)和S32(Theor?Appl?Genet,2007,114:515–524)等雜種雌配子不育位點。目前，怎樣利用已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的育性位點，特別是廣親和育性位點應(yīng)用于水稻秈粳交分子標(biāo)記育種還是一片空白。基于水稻秈粳交雜種不育的機理主要是單位點孢子體-配子體互作模式（IRRIRice?genetics.IRRI,Manila,1984,pp119–130），及在某一個育性位點上，秈稻和粳稻和廣親和品種中的等位基因分別為SX-i、SX-j和SX-n。基因型為SX-i/SX-j的雜合體由于攜帶SX-j的雌配子部分?jǐn)∮a(chǎn)生半不育小穗。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種秈粳雜種育性位點廣親和片段聚合的分子標(biāo)記方法。?

本發(fā)明的另一目的是提供用于秈粳亞種廣親和育性位點片段聚合的分子標(biāo)記引物組合。?

本發(fā)明的又一目的是提供所述的分子標(biāo)記引物組合在雜交育種中的應(yīng)用。?

本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：?

秈粳雜種育性位點廣親和位點片段聚合的分子標(biāo)記方法，用分子標(biāo)記引物W5、W7和W17分別對育性位點S5-n位點、S7-n位點和S17-n位點的廣親和育性片段通過分子標(biāo)記選擇來聚合，其中?

用標(biāo)記引物W5?

左端引物序列5’-AATGGAGTCGACCGTGTGTTCGTCG-3'（SEQ?ID?NO.1）?

右端引物序列5'-CCCCAAACCTGAAATCACCAGTGTT-3'（SEQ?ID?NO.2）?

擴增廣親和水稻品種DNA，獲得S5位點標(biāo)記片段大小為105bp；擴增秈稻品種DNA，獲得弱位點標(biāo)記片段大小為145bp；擴增粳稻品種DNA，獲得S5位點標(biāo)記片段大小為131bp；?

標(biāo)記引物W7?

左端引物序列5’-TTCAGCCTCGTATCGCTCCTA-3’（SEQ?ID?NO.3）?

右端引物序列5’-TGCTATCCTGGTTGCTCTGCT-3’（SEQ?ID?NO.4）?

擴增廣親和品種DNA，獲得S7位點標(biāo)記片段有2條帶，大小分別為140bp和175bp；擴增秈稻品種DNA，獲得S7位點標(biāo)記片段大小為150bp；擴增粳稻品種DNA，獲得S7位點標(biāo)記片段有2條帶，大小分別為140bp和150bp；?

標(biāo)記引物W17?

左端引物序列5’-GGTATCCATAATCTCCACAAC-3’（SEQ?ID?NO.5）?

右端引物序列5’-CTTTCTACATGACGATGAACA-3’（SEQ?ID?NO.6）?