[發明專利]一種柑橘全爪螨若螨的RNA干擾方法

有效

• 申請號: 201310030235.0
• 申請日: 2013-01-25
• 公開（公告）號: CN103053480A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 冉春;陳飛;劉浩強;李鴻筠;張云飛
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院柑桔研究所
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務所 50211
• 代理人: 郭云

1.一種柑橘全爪螨若螨的RNA干擾方法，其特征在于：按照如下步驟完成：

(1)、柑橘全爪螨若螨的飼養

在培養皿內制成梯級濾紙隔離臺，取洗凈的柑橘葉片，將葉面向下置于濾紙隔離臺上，用濕脫脂棉條壓住葉沿，在葉片上接種橘全爪螨雌成螨，產卵24h后去除雌成螨，所雌成螨產的卵置于恒溫光照培養箱中，控制溫度為25±1℃，相對濕度為70％-80％，光周期為L∶D=(14∶10)h連續培養5-7天，得到柑橘全爪螨若螨。

(2)、對柑橘全爪螨若螨進行dsRNA溶液處理

將孵化的若螨挑在新的葉片上，在處理好的葉片上滴一滴dsRNA溶液，用0號毛筆將幼螨逐個輕輕挑于液滴上，浸5s后挑出，將浸過液的若螨置于恒溫光照培養箱中控制溫度為25±1℃，相對濕度為70％-80％，光周期L∶D=(14∶10)h培養24h。所用dsRNA溶液為shRNA1溶液，其中shRNA1的堿基序列為：shRNA1：5′-GATCGTCTGTTATTTCACC-3′????SEQ?NO?1shRNA1溶液濃度為2.0-6.0μg/ml；

(3)、測定處理后柑橘全爪螨若螨蛻皮及存活情況

記錄喂食dsRNA溶液后的柑橘全爪螨若螨的蛻皮及存活情況，評價RNA干擾效果。

2.根據權利要求1所述的一種柑橘全爪螨若螨的RNA干擾方法，其特征在于：所述步驟(1)中，梯級濾紙隔離臺通過取直徑為9cm的培養皿鋪上0.7cm厚的海綿，海綿上鋪直徑略小于海綿的濾紙，加水至濾紙邊緣，制成梯級水隔離臺。

3.根據權利要求1所述的一種柑橘全爪螨若螨的RNA干擾方法，其特征在于：所述步驟(1)中，柑橘葉片為剛采摘完整、生長旺盛的柑橘葉片。

4.根據權利要求1所述的一種柑橘全爪螨若螨的RNA干擾方法，其特征在于：所述步驟(2)中，dsRNA是通過幾丁質酶和綠色熒光蛋白的cDNA序列，設計合成的雙鏈RNA。