[發明專利]人類免疫缺陷病毒1型一步法熒光定量PCR檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201310029521.5
• 申請日: 2013-01-25
• 公開（公告）號: CN103966356A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 遲大利;吳大治;夏懿
• 申請（專利權）人: 上海星耀醫學科技發展有限公司;上海復星醫藥（集團）股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬生物技術領域，涉及一種生物檢測技術，尤其涉及一種用于人類免疫缺陷病毒1型（HIV-1）RNA熒光定量檢測試劑盒。

背景技術

人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）是一種感染人類免疫系統細胞的慢病毒（Lentivirus），屬反轉錄病毒（Retrovirus）的一種。該病毒破壞人體的免疫功能，導致免疫系統的失去抵抗力，從而導致各種疾病病原體得以在人體內生存，發展到最后，導致艾滋病（即獲得性免疫缺陷綜合征，Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS），為一種至今無有效療法的致命性傳染病。自1981年在美國首次發現和確認以來，艾滋病已奪取超過3000萬人的性命，使它成為史上最具破壞力的全球性流行病之一，截至2011年5月底世界上約有6400萬人感染艾滋病毒，每天平均有7000宗新病例。目前，南亞和東南亞成為繼撒哈拉以南非洲之后的第二重災區。中國CDC估計，截止至2011年底，我國存活HIV攜帶者及艾滋病患者約78萬人，全年新發感染者4.8萬人，死亡2.8萬人。疫情已覆蓋全國所有省、自治區、直轄市，目前我國面臨艾滋病發病和死亡的高峰期，且已由吸毒、暗娼等高危人群開始向一般人群擴散，防艾、抗艾形勢嚴峻。

HIV感染后病毒載量的變化與疾病的進程有密切的相關性，HIV病毒載量的檢測可以預測疾病發生、發展以及預后，因此，HIV病毒載量的檢測可以監控疾病的發展過程，并為制定相應的治療方案和策略提供依據；而且病毒載量較高的孕婦造成母嬰傳播的危險性較大，可根據病毒載量確定孕婦是否需服用抗病毒藥物來減少HIV的母嬰傳播。抗HIV病毒藥物的作用主要是抑制病毒的復制，降低病毒載量。因此，病毒載量的檢測對疾病的監控、預防母嬰傳播以及觀察抗病毒藥物的療效都具有重要的意義。

根據基因差異，可將HIV分為HIV-1型和HIV-2型。一般，HIV-1病毒是絕大多數HIV感染的病原體，HIV-2病毒主要出現在非洲，尤其是在西非地區。HIV-2的傳播方式與HIV-1相同，都會發生機會性感染和AIDS，但HIV-2所致的免疫缺陷發展得較為緩慢和溫和。不同地區流行的亞型不同，同一亞型在不同地區的流行態勢也存在一定差異。目前，世界范圍內流行的主要為HIV-1型。在美國，因為HIV-2較為少見，所以HIV-2未被列為常規檢測。中國境內流行的HIV主要為M組HIV-1型（目前境內尚未見HIV-1 N組和O組的報道，HIV-2型感染病例的報道極少），其基因型主要為B/B’、BC重組型（包括CRF 07_BC重組型和CRF 08_BC重組型）以及AE重組型（CRF 01_AE重組型）。而且，HIV-1基因型具有一定的地域差異，不同的地區流行的HIV基因型也不盡相同，如CRF 07_BC重組型流行于四川、新疆等地，而CRF 08_BC重組型則流行于廣西等地。

目前，HIV的檢測方總體可分為抗體檢測和病毒檢測兩大類。病毒檢測包括細胞培養（病毒分離）、p24抗原檢測和病毒核酸檢測。早期對HIV的診斷主要是通過血清學試驗檢測抗HIV的抗體，間接地診斷HIV感染。近幾年，分子生物學方法不斷被應用到HIV的檢測中，HIV的實驗室診斷方法取得了很大的進展，核酸檢測已經成為了HIV實驗室診斷的發展方向。

傳統的核酸檢測方法是采用核酸雜交技術對目的核酸進行檢測，雖然采用放射性標記的探針可以提高檢測的敏感性，但仍然偏低，不能滿足臨床需要。最近幾年核酸檢測技術發展迅速，主要是采用各種擴增放大技術提高檢測的靈敏度。隨著擴增技術的成熟，可以將低拷貝的靶序列成對數級放大擴增，同時采用比放射性探針更靈敏的非放射性檢測系統（如電化學發光系統等），明顯提高核酸檢測的靈敏度，并減少放射性物質的污染。檢測HIV-1 RNA病毒載量的方法主要有分支DNA檢測（bDNA）、逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）和核酸序列擴增檢測（NASBA）等，其中，基于TaqMan探針技術的熒光定量RT-PCR方法已發展成為成熟、常用而有效的檢測手段。