[發(fā)明專利]一種蘇丹草胚接種轉(zhuǎn)基因技術(shù)

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310029246.7
• 申請日: 2013-01-27
• 公開（公告）號: CN103074367A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李杰勤;王麗華;詹秋文;趙庭;周青;萬海波;王茂輝
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽科技學(xué)院
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種蘇丹草胚接種轉(zhuǎn)基因技術(shù)包括接種液接種和暗箱培養(yǎng)，其特征在于，以蘇丹草種子為載體，進(jìn)行刺胚接種加接種液反復(fù)真空浸泡、充分接種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，其特征在于它包括①制備雙元載體接種液、②蘇丹草種子消毒、③無菌水浸種、④刺胚接種、⑤接種液抽真空浸種、⑥暗箱培養(yǎng)、⑦育苗栽培7個步驟。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，其特征在于所述的制備雙元載體接種液的做法是：將已經(jīng)轉(zhuǎn)入雙元載體的農(nóng)桿菌接種到100mL的YEP液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)2天，培養(yǎng)溫度為28℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，其特征在于所述的蘇丹草種子消毒的做法是：選取飽滿的蘇丹草種子先后用乙醇和84消毒液消毒，消毒結(jié)束后用滅菌水洗凈種子。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，其特征在于所述的無菌水浸種的做法是：將種子轉(zhuǎn)入滅菌水中28℃浸泡2-24小時，使種子充分吸脹。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，其特征在于所述的刺胚接種的做法是：將吸脹的種子取出置于已滅菌的培養(yǎng)皿中，用已消毒的鋼針蘸取OD₆₀₀為0.6的農(nóng)桿菌接種液扎刺胚芽，深度大約為1mm。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，其特征在于所述的接種液抽真空浸種的做法是：將刺完的種子放在含有200μmol/L乙酰丁香酮的農(nóng)桿菌接種液中抽真空到-0.1MPa浸種30min，恢復(fù)常壓后再抽真空到-0.1MPa浸種5min。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，其特征在于所述的暗箱培養(yǎng)的做法是：將種子置于發(fā)芽盒中，22℃恒溫培養(yǎng)箱暗濕潤培養(yǎng)4天。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，其特征在于所述的育苗和鑒定的做法是：將培養(yǎng)后的種子單粒播到營養(yǎng)缽中，置于合適的溫度生長，在出現(xiàn)3片葉時即可進(jìn)行轉(zhuǎn)基因植株的鑒定。