[發明專利]一種抗菌毛冬青三萜總皂苷及其應用

有效

• 申請號: 201310028968.0
• 申請日: 2013-01-25
• 公開（公告）號: CN103110673A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 林麗萍;梁敬鈺
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: A61K36/185
• 分類號: A61K36/185;A61P31/02;A61P1/02;A61K125/00;A61K127/00
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 裴詠萍

技術領域

????本發明涉及一種毛冬青三萜總皂苷及其應用，具體涉及一種具有較佳抗菌效果的毛冬青三萜總皂苷。?

背景技術

?牙周病和齲病都是以細菌感染為主的多因素影響下的進行性、破壞性疾病。與牙周病和齲病發生發展密切相關的細菌被稱為牙周致病菌和致齲菌。牙菌斑中絕大多數細菌為口腔正常菌叢，僅少數細菌與牙周病的發生、發展密切相關。在各型牙周病的病損區，常可分離出一種或幾種優勢菌，它們具有顯著的毒力或致病性，能通過多種機制干擾宿主防御能力，具有引發牙周破壞的潛能，稱之為牙周致病菌。重要的牙周致病菌包括：伴放線放線桿菌（Aa）、牙齦卟啉單胞菌(Pg)、福賽坦氏菌(Tf)、具核梭桿菌(Fn)、中間普氏菌(Pi)和變黑普氏菌(Pn)、黏放線菌(Av)?以及齒垢密螺旋體（Td）。其中具核梭桿菌(Fusobacterium?nucleatum?ATCC?25175，以下簡稱Fn),是一種專性厭氧桿菌,?常可在眼上、下的菌斑、牙周病灶以及感染根管、尖周病灶中檢測到,?近年來對Fn的研究逐漸深入,?一些現象也得到了解釋,?同時也漸漸顯露出它在尖周病、尤其是牙周病中的重要性。過去一直把該菌視為人體的正常菌群之一,?近年來,?由于從臨床標本中不斷分離出該菌,?引起國內外學者的關注,?被視為臨床上不可忽視的細菌。大量研究證實該菌為條件致病菌,?且具有較強的致病力,?在口腔乃至全身感染性疾病中檢出率極高,?廣泛存在于感染的牙髓、牙周和其他炎癥性病灶中。作為優勢菌種,與臨床厭氧菌感染的關系十分密切。?

而齲病是世界衛生組織提出的人類應重點防治的三大非傳染性疾病之一。導致齲病與齲齒的細菌為致齲菌。細菌在齲齒發生和發展過程中起著主導作用。近年來國際上公認的致齲菌種類很多，最主要的是某些變形鏈球菌和乳酸桿菌。多年的研究已經證實，變形鏈球菌（S.mutansATCC?25175，以下簡稱Sm），是人類齲病的始發因素，是目前公認的最重要的致齲菌，其在唾液和菌斑中的水平與齲的發生有高度的正相關關系。變形鏈球菌是牙菌斑早期定植菌,?因能快速發酵大多數碳水化合物,?產生以乳酸為主的酸性產物,?且可以產生葡萄糖基轉移酶,?合成不溶性葡聚糖,?與其表面的脂磷壁酸等構成牙菌斑的骨架,?有利于其他附著力低的細菌在牙面的定植,?在實驗動物變型鏈球菌能誘發齲齒,?目前被公認為齲病的主要致病菌。?

毛冬青為冬青科（Aquifoliaceae）冬青屬植物Ilex?pubescens?Hook.?et?Arn.，別名烏尾丁、六月霜、細葉冬青、山冬青、毛披樹、水火藥、火烙木等。生于山野坡地、丘陵等灌木叢中。主產廣東、廣西、福建、江西等地。毛冬青作為中藥使用歷史悠久，曾收載于1977年版《中國藥典》。毛冬青的制劑毛冬青注射劑和毛冬青片劑曾被收載于中藥部頒標準，為心血管疾病用藥，有擴張血管及抗菌消炎作用。用于冠狀動脈硬化性心臟病，血栓閉塞性脈管炎，并用于中心性視網膜炎，小兒肺炎。目前尚未有對其進行口腔抗菌方面的研究。?

發明內容

本發明的目的是為了尋求抑制口腔細菌的新藥物。?

為了達到上述目的，本發明提供了一種毛冬青三萜總皂苷，該毛冬青三萜總皂苷由原料毛冬青根莖或葉制備，含有冬青素的重量百分含量為20%～50%。通過以下步驟制備：?

（1）提取：取毛冬青根莖或葉，采用50%～70%乙醇提取，過濾，取濾液；

（2）沉淀：取步驟（1）中制得的濾液，回收20%～80%的溶劑，靜置沉淀，過濾，得沉淀A和濾液B備用；

（3）粗制：取步驟（2）中的沉淀A即為所述毛冬青三萜總皂苷；或取步驟（2）中的濾液B采用大孔吸附樹脂洗脫，洗脫劑分別采用20%～30%乙醇溶液、50%～90%乙醇溶液進行梯度洗脫（優選洗脫梯度為30%乙醇和70%乙醇），收集50%～90%乙醇溶液，濃縮干燥得粗提物C即為所述毛冬青三萜總皂苷。

或將步驟（3）中的沉淀A和粗提物C混合，即得所述毛冬青三萜總皂苷。?

或將步驟（3）中的沉淀A和粗提物C混合，進行硅膠柱層析，洗脫劑分別采用體積比為30:1～20:1的氯仿-甲醇混合液、10:1～5:1的氯仿-甲醇混合液進行梯度洗脫（優選洗脫梯度為30:1的氯仿-甲醇混合液和10:1的氯仿-甲醇混合液），收集體積比為10:1～5:1的氯仿-甲醇混合液，濃縮干燥即為所述毛冬青三萜總皂苷。?

其中，步驟（1）中提取時乙醇與毛冬青根莖或葉的體積重量比為1～10L/kg，提取溫度為50～81℃，提取時間為1～5h。?