[發(fā)明專利]檢測或輔助檢測耐多藥結(jié)核分枝桿菌的乙胺丁醇耐藥性試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310024422.8
• 申請(qǐng)日: 2013-01-23
• 公開（公告）號(hào): CN103060464A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石大偉;甄偉;朱國峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測或輔助檢測耐多藥結(jié)核分枝桿菌的乙胺丁醇耐藥性試劑盒。

背景技術(shù)

耐多藥(MDR)是指結(jié)核分枝桿菌至少對(duì)利福平(RIF)和異煙肼(INH)兩種一線抗結(jié)核藥物發(fā)生耐藥。耐多藥結(jié)核病不僅治療周期長、藥物副作用大，治療效果差、治愈率低、死亡率高，而且治療費(fèi)用高，給病人帶來了很重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。早期快速診斷結(jié)核分枝桿菌的耐藥性有利于耐多藥結(jié)核病的治療和控制。與傳統(tǒng)基于固體、液體培養(yǎng)的藥敏檢測方法相比，基于分子生物學(xué)的藥敏檢測方法(耐藥性的分子診斷)具有快速、敏感和成本低的優(yōu)勢(shì)。

乙胺丁醇(EMB)是廣泛應(yīng)用的一線抗結(jié)核藥物,該藥通過抑制embB基因編碼的阿拉伯糖基轉(zhuǎn)移酶的活性，干擾分枝桿菌細(xì)胞壁成分阿拉伯半乳糖的合成。EmbB基因被認(rèn)為是乙胺丁醇耐藥相關(guān)基因，其306位密碼子(embB306)的突變被認(rèn)為是乙胺丁醇耐藥快速診斷的分子標(biāo)記。

目前一些商品化的快速診斷產(chǎn)品，例如GenoType?MTBDRsl(Hain?Lifescience,Germany)和QIAplex?TB?assay(Genaco)，通過檢測embB306單個(gè)位點(diǎn)的突變來預(yù)測結(jié)核菌的耐藥性，但是由于不同地區(qū)流行菌株的耐藥相關(guān)基因突變類型和頻率不同，這些工具的靈敏度和特異度在不同地區(qū)也不同，臨床上約有30～70%的乙胺丁醇耐藥菌株中能夠檢測到該位點(diǎn)突變。因此乙胺丁醇耐藥性分子診斷的靈敏度需要進(jìn)一步提高，迫切需要一個(gè)能夠適用于不同地區(qū)的更有效的乙胺丁醇耐藥性分子診斷的試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種檢測或輔助檢測耐多藥結(jié)核分枝桿菌的乙胺丁醇耐藥性試劑。

本發(fā)明提供的試劑，包括用于檢測embB基因中embB354突變位點(diǎn)的產(chǎn)品；所述embB基因的野生型核苷酸序列為序列表中序列4；

所述embB354突變位點(diǎn)為序列表中的序列1自5’末端第1060-1062位核苷酸；所述突變位點(diǎn)的野生型核苷酸序列為GAC，突變型核苷酸序列為GCC。

上述試劑中，所述用于檢測embB基因中embB354突變位點(diǎn)的產(chǎn)品包括比對(duì)卡和用于擴(kuò)增包括所述embB354突變位點(diǎn)在內(nèi)的所述embB基因片段引物對(duì)：

所述比對(duì)卡上記載含有所述embB354突變位點(diǎn)的片段的核苷酸序列。在本發(fā)明的實(shí)施例中，該比對(duì)卡為A）比對(duì)卡，記載如下核苷酸序列（embB354突變位點(diǎn)）：序列表中序列1自5’末端第851-1962位核苷酸，其中，第1060-1062位核苷酸GAC或GCC；第1489-1491位核苷酸CAG；第1216-1218位核苷酸GGC；第916-918位核苷酸為ATG。

上述試劑中，所述含有所述embB354突變位點(diǎn)的片段還含有embB306突變位點(diǎn)、embB406突變位點(diǎn)和embB497突變位點(diǎn)中的至少一種；所述embB306突變位點(diǎn)為序列表中的序列1自5’末端第916-918位核苷酸；所述embB306突變位點(diǎn)序列為ATG、GTG、TTG、ATA、ATC或ATT；所述embB306突變位點(diǎn)野生型核苷酸序列為ATG，突變型核苷酸序列為GTG、TTG、ATA、ATC或ATT；

所述embB406突變位點(diǎn)為序列表中的序列1自5’末端第1216-1218位核苷酸；所述embB406突變位點(diǎn)序列為GGC、AGC、TGC、GAC或GCC；所述embB406突變位點(diǎn)野生型核苷酸序列為GGC，突變型核苷酸序列為AGC、TGC、GAC或GCC；

所述embB497突變位點(diǎn)為序列表中的序列1自5’末端第1489-1491位核苷酸；所述embB497突變位點(diǎn)序列為CAG、AAG、CCG或CGG；所述embB497突變位點(diǎn)野生型核苷酸序列為CAG，突變型核苷酸序列為AAG、CCG或CGG。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，比對(duì)卡為B）比對(duì)卡，記載如下四組核苷酸序列：

1）序列表中序列1自5’末端第851-1962位核苷酸，其中，第1060-1062位核苷酸GAC或GCC、第1489-1491位核苷酸CAG、第1216-1218位核苷酸GGC、第916-918位核苷酸為ATG（embB354突變位點(diǎn)）；

2）序列表中序列1自5’末端第851-1962位核苷酸，其中，第916-918位核苷酸為ATG或GTG或TTG或ATA或ATC或ATT；第1060-1062位為GAC、第1216-1218位為GGC、第1489-1491位為CAG（embB306突變位點(diǎn)）；