[發明專利]一種檢測H2O2的方法

有效

• 申請號: 201310024410.5
• 申請日: 2013-02-26
• 公開（公告）號: CN103115882A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 黃和;韓毓旺;盧圣國;段許佳;朱瑾
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 徐蓓

技術領域

本發明屬于生物傳感和生物分析領域，涉及一種檢測H₂O₂的方法，具體涉及利用聯乙炔囊泡檢測H₂O₂的方法。

背景技術

過氧化氫是一種重要的細胞代謝產物。最新研究表明，過氧化氫在生命體系過程作為信號分子參與多種生物學效應啟動，同時與其他大分子其反應，其含量的表達與心血管疾病、腫瘤、神經元損傷等相關。在臨床診斷上，過氧化氫是大多數氧化還原反應的重要產物。過氧化氫在工業上常用作漂白劑和清洗劑，但其殘留物嚴重危害環境。因此，發展一種工藝簡單、靈敏、重現性及穩定性好的過氧化氫檢測方法對生命健康、環境領域具有重要的意義。

現有技術主要包括熒光法、化學發光法、高效液相色譜法，基于酶傳感的電化學方法等。然而，在應用于H₂O₂的檢測時，這些方法仍然存在檢測線高、分析時間長、重復性不好、儀器昂貴、工藝復雜等缺陷。

申請人在前期工作中，首次發現H₂O₂釋放出的羥基自由基可特異性的作用于聯乙炔單體，使聯乙炔囊泡聚合而產生顯色反應，從而為發明一種廉價、簡便、穩定性好、靈敏度高、重現性好、分析時間短的H₂O₂的檢測技術提供了理論支持。

發明內容????

本發明的技術目的在于提供一種全新的過氧化氫檢測方法，為了達到技術目的，本發明的技術方案為：

一種檢測H₂O₂的方法，其特征在于，首先用聯乙炔單體制成聯乙炔囊泡，于聯乙炔單體囊泡溶液中加入待測樣品，至顯色反應結束，測定反應體系在620至680nm處的吸光值，以測得樣品中是否含有H₂O₂。

本發明所述的檢測H₂O₂的方法，其特征在于，在聯乙炔囊泡溶液中加入辣根過氧化物酶后再加入待測H₂O₂樣品。

其中，加入辣根過氧化物酶（HRP）的技術目的是加快過氧化氫對羥基自由基的釋放速率，從而提高檢測靈敏度和檢測效率；不應該理解為辣根過氧化物酶作用于聯乙炔單體囊泡溶液而產生了顯色反應。

本發明所述的檢測H₂O₂的方法，其特征在于，顯色反應的時間為0.5至4h。

本發明所述的檢測H₂O₂的方法，其特征在于，所述聯乙炔單體囊泡溶液的制作步驟為：

（1）取聯乙炔單體溶于氯仿中，過0.45?μm濾膜，旋轉蒸發去除氯仿，加蒸餾水，配制聯乙炔單體摩爾含量為0.2至2?mmol/L的溶液；

（2）將上述混合物于60至90℃下探頭超聲5至30?min，得到聯乙炔單體囊泡溶液。

本發明具有以下有益效果：提供了一種全新的、廉價、簡便、穩定性好、靈敏度高、重現性好、分析時間短的過氧化氫檢測方法。

本發明的技術原理為，聯乙炔囊泡在羥基自由基的作用下發生聚合反應，聚合反應生成的聚聯乙炔在波長為620-680nm處有特征吸收峰，通過檢測反應后吸收峰的有無，便可以檢測過氧化氫的有無。本發明的技術原理圖如圖1所示。

附圖說明

圖1為聯乙炔囊泡檢測過氧化氫原理圖。

圖2為聯乙炔囊泡檢測H₂O₂的實物圖。

圖3為聯乙炔檢測過氧化氫的吸光度全波長掃描圖。

圖4為聚聯乙炔囊泡特征吸光值的對數值和H₂O₂濃度的對數值之間的線性關系圖。

具體實施方式

下面結合具體實例對本發明檢測H₂O₂的方法進行詳細說明。

實施例1

本實施例說明聯乙炔單體囊泡的制備過程。

取聯乙炔單體溶于氯仿中，過0.45?μm濾膜，旋轉蒸發去除氯仿，加蒸餾水，配制聯乙炔單體摩爾含量為0.2?mmol/L的溶液；將聯乙炔單體溶液于60℃下探頭超聲5?min，得到聯乙炔囊泡溶液。

實施例2

本實施例說明聯乙炔單體囊泡的另一制備過程。