[發明專利]一種納米磁微粒的重懸方法

無效

• 申請號: 201310024311.7
• 申請日: 2013-01-23
• 公開（公告）號: CN103116020A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 于大為;程曉蕾
• 申請（專利權）人: 蘇州浩歐博生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N21/76
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛;趙艷

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種納米磁微粒的重懸方法。

背景技術

磁性分離技術是以納米或微粒級的磁性微粒為載體，利用結合于磁性微粒表面的蛋白質所提供的特異的親和特性，在加磁場的定向控制下，通過親和吸附、清洗、解吸操作，可以進一步從復雜的生物體系中分離到目標物分子，具有磁性分離簡單方便、親和吸附高特異性及高敏感性等眾多優點。應用于磁性分離技術的磁性載體應具備以下特點：①粒徑比較小，比表面積較大，具有較大的吸附容量；②物理和化學性能穩定，有較高機械強度，使用壽命長；③含有可活化的反應基團，以用于親和配基的固定化；④粒徑均一，能形成單分散體系；⑤懸浮性好，便于反應的有效進行。

納米技術的出現，促進了磁性微粒的應用。納米磁微粒粒徑小，加至反應液中呈懸浮狀態，加磁場后可迅速分離。納米磁微粒還可通過免疫反應與標記有熒光素、化學發光物質、酶等物質連接，建立各種免疫分析方法。

納米磁微粒化學發光免疫診斷試劑綜合采用了目前國際上的兩大主流免疫分析尖端技術——懸浮納米磁微粒載體技術、化學發光檢測技術，能夠準確定量的檢測人類血清中的免疫抗原或抗體，可用于過敏、自身免疫、甲狀腺功能、腫瘤、性激素、傳染病等相關標志物的檢測。然而，納米磁微粒包被抗體或抗原后，保存的過程中容易發生集聚現象，形成直徑在幾微米到幾百微米大小的團簇，甚至肉眼可見聚集塊，導致納米磁微粒應用到試劑中，試劑的靈敏度降低。

因此，實有必要開發一種納米磁微粒的重懸方法，以解決其包被抗體后保存過程中產生集聚現象造成應用時試劑靈敏度低的問題，該方法是納米磁微粒化學發光免疫診斷試劑生產和發展的核心技術之一。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的是提供一種納米磁微粒的重懸方法，以解決納米磁微粒包被抗體或抗原后保存過程中產生集聚現象造成應用時靈敏度低的問題。

為了達到上述目的，本發明提供一種納米磁微粒的重懸方法，其特征在于：取納米磁微粒的懸浮液置于容器內并將該容器置于冰水浴中，采用超聲波破碎機對納米磁微粒進行超聲重懸。

較佳地，所述超聲重懸的工藝參數為：超聲功率50~500W，超聲時間1～10分鐘。

相較于現有技術，采用本發明提供的納米磁微粒的重懸方法對表面包被有抗體或抗原的納米磁微粒的懸浮液進行重懸后，再將其應用到納米磁微粒化學發光免疫診斷試劑中，試劑的靈敏度有較大提高。

附圖說明

圖1為對比例中PSA試劑的靈敏度評價擬合曲線。

圖2為本發明實施例一中PSA試劑的靈敏度評價擬合曲線。

圖3為本發明實施例二中PSA試劑的靈敏度評價擬合曲線。

圖4為本發明實施例三中PSA試劑的靈敏度評價擬合曲線。

具體實施方式

在以下對比例和實施例中，均通過采用前列腺特異性抗原單克隆抗體包被的納米磁微粒化學發光測試試劑（PSA試劑）對“O”濃度的待測血清樣本進行檢測，并通過計算和擬合曲線進行靈敏度評價。

材料與儀器：

前列腺特異性抗原單克隆抗體包被的納米磁微粒化學發光測試試劑（PSA試劑），所述試劑中的納米磁微粒的懸浮液為包被有PSA的納米磁微粒（即PSA納米磁微粒）的懸浮液；Magl?i?a60化學發光免疫分析儀，市售；JY92-II超聲波破碎機，購自寧波新芝生物科技股份有限公司。

其中，所述的前列腺特異性抗原單克隆抗體包被的納米磁微粒化學發光測試試劑包括：

該PSA試劑包括含有熒光素（F?I?TC）標記的PSA抗體的溶液（簡稱第一試劑）和包被有熒光素抗體的磁微粒的懸浮液（簡稱磁分離試劑），堿性磷酸酶（ALP）標記的PSA抗體的溶液（簡稱第二試劑）。

所述的PSA試劑通過以下方法制備得到：

第一試劑的制備

（1）材料與儀器：以磷酸鹽緩沖液保存的PSA抗體（純度超過95wt%，濃度為1mg/ml）；異硫氰酸熒光素（FITC），碳酸氫鈉等試劑應達到化學純；G-25凝膠純化柱采購自GE公司。

（2）制備步驟：

①用0.2mol/L?pH9.0的碳酸鹽緩沖液配制0.5mg/ml的FITC溶液；

②按照PSA抗體與FITC分子比為1:20的比例在抗體溶液中加入步驟①所配FITC溶液，混合均勻，室溫靜置12h小時，反應生成PSA抗體-FITC連接物；

③將經過步驟②的反應液通過G-25凝膠柱進行分離，除去未反應的FITC，得到含有PSA抗體-FITC連接物（即FITC標記的PSA抗體）的溶液；