[發明專利]一種人羊膜的脫細胞方法

有效

• 申請號: 201310023898.X
• 申請日: 2013-01-23
• 公開（公告）號: CN103114073A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 竺亞斌;史佩娜;沈秋霞;高夢娜;盧珍珍
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 蔡菡華

1.一種人羊膜的脫細胞方法，其特征在于包括以下具體過程：

（1）、將新鮮的人胎盤羊膜除去血塊和絨毛膜，留下包含上皮細胞層、基底膜和無血管基質的完整羊膜組織，并以pH值為7.4的磷酸緩沖液（簡稱PBS）清洗，得到一干凈半透明的羊膜；

（2）、取體積濃度為75%的酒精將上述得到的半透明羊膜漂洗1～2次，再用PBS漂洗2～4次，然后將青霉素和鏈霉素混合到PBS中形成雙抗/PBS溶液，所述的青霉素和鏈霉素又叫雙抗，其中青霉素與鏈霉素在PBS中的含量均為100～300U/L，再將半透明羊膜按體積比為1:1～3的比例置于雙抗/PBS溶液中浸泡震蕩，每12小時換液一次，共兩次；

（3）、將雙抗、表面活性劑混合到PBS中形成綜合PBS溶液，其中：青霉素與鏈霉素在PBS中的含量均為100～300U/L，表面活性劑占PBS的重量比為1%，并將半透明羊膜按體積比為1:1～3的比例置于綜合PBS溶液中浸泡震蕩，每6～8小時換液一次，共兩次，然后將半透明羊膜取出，用PBS漂洗1～2次；

（4）、將半透明羊膜浸泡在胰脂酶含量為500～5000U/L的胰脂酶/PBS溶液中，半透明羊膜與胰脂酶/PBS溶液的體積比為1:1～3，并在溶液溫度為30～40℃下處理10～20小時，然后將半透明羊膜取出用PBS漂洗1～2次，再將半透明羊膜浸泡在DNA酶含量為1000～3000U/L的DNA酶/PBS溶液中，半透明羊膜與DNA酶/PBS溶液的體積比為1:1～3，在溶液溫度為30～40℃下處理3～5小時；

（5）、將半透明羊膜從DNA酶/PBS溶液中取出，并將半透明羊膜置于青霉素與鏈霉素含量均為100～300U/L的雙抗/PBS溶液中震蕩漂洗，每12小時換液一次，共兩次，最后將脫細胞后的半透明羊膜取出放到PBS中，在4℃的溫度下保存待用。

2.如權利要求1所述的一種人羊膜的脫細胞方法，其特征在于所述的表面活性劑采用Triton?X-100。