[發(fā)明專利]一種篩選抗藍(lán)耳病豬的USP18分子標(biāo)記育種方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310019340.4
• 申請日: 2013-01-18
• 公開（公告）號: CN103173539A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姜運良;李艷平;王鵬飛;蔣成蘭;康麗;王力圓
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子遺傳學(xué)領(lǐng)域，具體涉及了一種篩選抗藍(lán)耳病豬的育種方法，通過判斷豬USP18基因5′調(diào)控區(qū)突變位點的多態(tài)性來進(jìn)行選種，并人為地應(yīng)用該突變位點實現(xiàn)抗藍(lán)耳病豬的育種。

背景技術(shù)

豬繁殖與呼吸綜合癥（Porcine?reproductive?and?respiratory?syndrome,PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合癥病毒(PRRSV)引起的一種病毒性傳染病。PRRS導(dǎo)致妊娠母豬嚴(yán)重繁殖障礙，仔豬高死亡率以及各年齡段尤其仔豬的呼吸道疾病。豬的抗病性狀屬于中等遺傳力水平的閾性狀，由病毒引起的呼吸道疾病的抗性是可以遺傳的。Halbur等首先報道了關(guān)于PRRSV在豬品種之間存在著遺傳差異（Halburetal.，1998）。感染了PRRV的杜洛克、皮特蘭和長白豬在平均日增重，酶聯(lián)免疫吸附測定的比值和PRRSV誘導(dǎo)的肺損傷方面都存在著差異Vincent?et?al.，2005)。Vincen等(2006)利用流式細(xì)胞儀測定了外周血單核巨噬細(xì)胞對PRRSV感染率的差異，將豬群分為高易感、低易感2個系，于6周齡接種病毒，發(fā)現(xiàn)高易感系在接種21d后臨床癥狀更嚴(yán)重，且高易感系血清病毒滴度比低易感系高。Reiner等（2010）比較了德國地方品種小型豬和皮特蘭豬感染PRRSV后臨床狀態(tài)，病毒量和血清抗體轉(zhuǎn)換情況，發(fā)現(xiàn)皮特豬在感染后6d，病毒量達(dá)到最高，感染率為100%，小型豬在感染后12d病毒量達(dá)到高峰，感染率為87%，皮特蘭豬病毒復(fù)制量比小型豬高，小型豬產(chǎn)生更有效的抗體，結(jié)果表明這兩種豬對PRRSV反應(yīng)存在遺傳差異。以上結(jié)果表明豬對PRRSV的抗性存在遺傳差異，地方品種豬抗PRRSV的能力較強(qiáng)。豬不同品種間對PRRSV的抗性存在遺傳差異，這為抗藍(lán)耳病豬的育種提供了基礎(chǔ)和前提。

從藍(lán)耳病的流行病學(xué)調(diào)查可以看出，易感豬多數(shù)為西方瘦肉型豬而我國的地方豬種染病的較少。大蒲蓮豬是山東省體型較大的華北型黑豬，具有抗病耐粗、多胎高產(chǎn)、哺育能力強(qiáng)、肉質(zhì)好等優(yōu)良特性。調(diào)查顯示，自2006年以來，在大批西方瘦肉型豬感染藍(lán)耳病死亡的情況下，大蒲蓮豬及大蒲蓮豬為母本的二元雜交豬均表現(xiàn)出對PRRSV超強(qiáng)的抗病能力。因此如何利用該特性研究對PRRSV超強(qiáng)的抗病能力，成為本領(lǐng)域急需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

基于上述的原因，本發(fā)明通過篩選出豬抗藍(lán)耳病相關(guān)的基因標(biāo)記，建立豬分子標(biāo)記輔助育種方法，為豬抗藍(lán)耳病品種培育提供基因標(biāo)記和技術(shù)方法。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，發(fā)明人通過進(jìn)一步的實驗發(fā)現(xiàn)攻毒后大蒲蓮豬和杜大長雜交豬USP18基因的表達(dá)存在顯著差異，即攻PRRSV的大蒲蓮豬USP18表達(dá)顯著上調(diào)；通過對大蒲蓮豬和杜大長雜交豬USP18基因5′調(diào)控區(qū)的對比，發(fā)現(xiàn)－1533位點A到G改變會引起轉(zhuǎn)錄因子FOXI1a的結(jié)合，進(jìn)而降低了USP18基因轉(zhuǎn)錄的功能，因此可以以－1533位點為A為分子標(biāo)記選擇USP18高表達(dá)的豬只組建基礎(chǔ)群進(jìn)行育種，對于提高豬群體的抗藍(lán)耳病特性具有重要的意義，可見檢測與突變相關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)記不僅方法簡便快速，而且不受環(huán)境影響，并可實現(xiàn)早期選種。

USP18（ubiquitin?specific?protease18）編碼去泛素化酶，屬于泛素特異性蛋白酶家族中的一員，通過識別干擾素刺激應(yīng)答元件啟動子或與JAK競爭與α-干擾素受體2（IFNAR2）的結(jié)合，負(fù)調(diào)控α-干擾素調(diào)控的信號通路；也是對α-干擾素敏感性及藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的負(fù)調(diào)控因子；它的突變導(dǎo)致α/β-干擾素信號通路的超活化并抑制STAT4誘導(dǎo)的γ-干擾素的產(chǎn)生，使小鼠對沙門氏菌易感（Richeretal.,2010）;研究證實，去泛素化從細(xì)胞生長到先天性免疫反應(yīng)等很多調(diào)控過程中都起著重要的作用，例如癌癥、凋亡和疾病的感染(Johnston?and?Burrows2006)。USP18基因敲除掉小鼠胚胎成纖維細(xì)胞干擾素的表達(dá)增強(qiáng)，抵抗由VSV和SNV引起的細(xì)胞病變，表明USP18在抵抗病毒侵染的免疫反應(yīng)中具有重要作用（Ritchie?et?al.，2011)。Zhang等（1999）的研究表明，豬感染PRRSV后，肺和扁桃體中USP18基因的表達(dá)顯著上調(diào)，與發(fā)明人觀察到的結(jié)果一致，表明USP18基因與豬的抗藍(lán)耳病有關(guān)。USP18的過表達(dá)有降低豬PRRSV復(fù)制的作用（Ait-Ali?et?al.,2009）。