[發明專利]一種核苷酸和/或寡核苷酸及其制備方法有效

申請號：	201310018205.8	申請日：	2013-01-18
公開（公告）號：	CN103936805A	公開（公告）日：	2014-07-23
發明（設計）人：	席真;黃金宇;陸威	申請（專利權）人：	昆山市工業技術研究院小核酸生物技術研究所有限責任公司
主分類號：	C07H19/10	分類號：	C07H19/10;C07H21/02;C07H1/00
代理公司：	北京潤平知識產權代理有限公司 11283	代理人：	王鳳桐;周建秋
地址：	215347 江蘇省蘇***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種核苷酸寡核苷酸及其制備方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及化學生物學領域，具體地，涉及一種核苷酸和/或寡核苷酸，以及該核苷酸和/或寡核苷酸的制備方法。

背景技術

化學合成寡核苷酸是指通過促使核苷酸單體間形成5’-3’磷酸二酯鍵，從而將多個核苷酸單元連接為寡核苷酸鏈的過程，其中涉及保護的核苷酸的合成。

合成寡核酸的方法有固相合成法和液相合成法，固相合成法通常使用亞磷酰胺縮合反應方式，液相合成法通常使用磷酸三酯縮合反應方式或者氫膦酸酯縮合反應方式。相比于固相合成法，液相合成具有中間體易鑒定，反應規模易方達的特點。因此，液相合成法更適用于規模制備寡核酸，這在合成生產醫藥用途的寡核酸上具有重要意義。

氫膦酸法合成寡核酸是一種高效的縮合方式，但是在應用液相氫膦酸法合成RNA的時候，缺少一種好的保護基用于保護核苷3’端，在文獻中所報道的例如用乙酰丙?；Ｗo核苷3’端的方法只適用于合成DNA，當應用于合成RNA時，乙酰丙酰基的脫除條件會導致核糖核苷2’位保護基（如TBDMS）發生2’→3’的遷移反應，導致產率降低和產生副產物。

發明內容

本發明的目的是提供一種液相氫膦酸法合成RNA的方法，克服了目前的固相寡核苷酸合成方法的合成規模小、成本高等缺點，提供一種能夠大規模合成寡核苷酸的方法。

本發明中設計了一種硼烷基掩蔽的氫膦酸三酯核苷酸，可以應用于液相氫膦酸法合成RNA中，這種硼烷基氫膦酸三酯核苷可經過脫保護直接得到氫膦酸單酯核苷，并應于縮合反應中，不會引起2’位保護基發生2’→3’的遷移反應。本發明可應用于液相法規模制備RNA。

本發明提供了一種式（1）所示的核苷酸和/或寡核苷酸：

式（1）

其中，R為氫或R₁，R₁表示三苯甲基或單甲氧基三苯甲基；

R₂和R₇各自獨立地為具有位阻型硅烷結構的基團；

m為0-100的整數，n為0或1；

R₃和R₈各自獨立地為環外氨基被?；Ｗo的鳥嘌呤基、環外氨基被酰基保護的腺嘌呤基、環外氨基被?；Ｗo的胞嘧啶基、胸腺嘧啶基或尿嘧啶基，且各個重復單元中的R₃相同或不同；

R₄為或-S-CH₂CH₂CN；R₄’為氫或R₄；

R₅和R₆各自獨立地為-CH₂CH₂CN或R₉為-CH₃、鹵素原子、-NO₂或-OCH₃。

本發明提供的式（1）的物質中，當R為H時，式（1）與如下所述的x大于等于1時的式（2）等價；當R為R₁時，式（1）與如下所述的式（4）等價。