[發明專利]一種家蠶幼蟲體1-脫氧野尻霉素含量的測定方法無效
| 申請號： | 201310015381.6 | 申請日： | 2013-01-16 |
| 公開（公告）號： | CN103091421A | 公開（公告）日： | 2013-05-08 |
| 發明（設計）人： | 時連根;張作法;劉淑梅;金衛明;費建明;李玉峰;趙麗華;施國方;黃秀娣 | 申請（專利權）人： | 浙江大學;湖州市農業科學研究院 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務所有限公司 33200 | 代理人： | 林懷禹 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 家蠶 幼蟲 脫氧 霉素 含量 測定 方法 | ||
1.一種家蠶幼蟲體1-脫氧野尻霉素含量的測定方法，其特征在于：
1）家蠶幼蟲于-50℃下真空干燥36?h，于-15℃下超微粉碎10~15?min，過80~100目篩，得到家蠶幼蟲粉；
2）取家蠶幼蟲體粉，按重量體積比為1：700~800比例，加入0.05?mol/L?HCl，常溫下渦流15~20?s并超聲波處理20~30?min后，用21690?g離心20?min，收集上清液，沉淀物再按上述步驟提取一次，合并兩次上清液，定容得供試液；
3）取10?μL供試液，與10?μL?0.4?mol/L、pH8.5的硼酸鉀緩沖液混和，加入20?μL?5?mmol/L?FMOC-Cl液，混勻并在20℃水浴鍋中反應20~25?min，加10?μL?0.1mol/L甘氨酸液，中和剩余的FMOC-Cl來終止反應；
4）反應液用950?μL質量百分比為?0.1%醋酸液稀釋，生成的DNJ-FMOC，并用孔徑0.2?μm尼龍吸管式過濾器過濾，得測定液；
5）將10?μL測定液用進樣器注入色譜柱為DIAMONSIC?C18柱的Waters?600高效液相色譜儀，以體積比為1：1的乙腈-0.1%醋酸為流動相，按1.0?mL/min流速在常溫下洗脫；
6）用激發光254?nm、發射光322?nm?的Waters?474熒光檢測器檢測洗脫曲線，根據DNJ-FMOC色譜峰面積按回歸方程Y=0.0002X+?2.9815計算出1-脫氧野尻霉素含量。
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