[發明專利]一種簡易、快速、靈敏的東海原甲藻現場檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201310010931.5
• 申請日: 2013-01-11
• 公開（公告）號: CN103060454A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 陳國福;張春云
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學（威海）
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/89
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種簡易、快速、靈敏的東海原甲藻現場檢測試劑盒，其特征在于，由以下試劑組成：(1)?試劑A為自然樣品核酸粗提試劑，其組成為：2%?(m/v)?CTAB,?0.5%?(v/v)?β-mercaptoethanol,?1.4?M?NaCl,?20?mM?EDTA,?100?mM?Tris-Cl,?10?U?RNase?Inhibitor；

（2）試劑B為反轉錄特異性引物溶液，其濃度為：10?μmol/L；核酸序列為：5’-?CCTTGGTCCGTCTTTCAAGA?-3’；

（3）?試劑C為反轉錄反應液I，其組成為：142.86?mM?Tris-HCl，?214.29?mM?KCl;?8.57?mM?MgCl₂,?28.57?mM?DTT和11.43?mM?dNTP；

（4）試劑D為反轉錄反應液II，其組成為：20?U/μL?RNase?Inhibitor，100?U/μL?RTase?M-MLV；

（5）試劑E為核酸擴增反應液I，組成為：

(5.1)內部引物：濃度：2.17?μM；核酸序列?(PLF3)：5’-CCTGCCTTGTGTGTCA?ACG?-3’,?核酸序列?(PLB3)：5’-AGTCATCGTCTTTGCG?TCAG?-3’；

?(5.2)外部引物：濃度：0.22?μM；核酸序列?(PLFIP)：5’-CCGCAAATGAGTTCTGCCAAGGTTTTGCGATCGAGGAAAACTCCA-3’,?核酸序列(PLBIP)：5’-GTCTGGTTGCAGTGTCTTTGGCTTTTAAATGCCCAAGTCACCTGG-3’)；

(5.3)?0.43?mM?dNTP；

(5.4)1.09?M?甜菜堿；

(5.5)?Bsm?Buffer：21.74?mM?Tris-HCl?(pH?8.8),?10.87?mM?KCl,?10.87?mM?(NH4)₂SO₄,?2.17?mM?MgSO₄,?0.11%?(v/v)?Triton?X-100；

（6）試劑F為核酸擴增反應液II，即8?U/μL?Bsm?DNA?polymerase?large?fragment；

（7）試劑G為顯色液GeneFinder^TM；

（8）對照:

(8.1)陽性對照檢測樣品：東海原甲藻的總RNA；

(8.2)陰性對照檢測樣品：赤潮異灣藻的總RNA。