[發明專利]一種超聲生物效應介導的重組人血管內皮抑制素控釋制劑

無效

• 申請號: 201310006275.1
• 申請日: 2013-01-08
• 公開（公告）號: CN103055302A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 陳志奎;林禮務;薛恩生
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學附屬協和醫院
• 主分類號: A61K38/17
• 分類號: A61K38/17;A61K47/42;A61K9/00;A61P35/00
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

技術領域

本發明涉及一種載重組人血管內皮抑制素的生物膠制劑及其在制備超聲聯合微泡造影劑產生的生物效應介導下抑制腫瘤血管生成藥物中的應用。

背景技術

血管內皮抑制素是近年來發現的一種具有抑制血管生成的蛋白質藥物，其通過特異性作用于新生血管內皮細胞并抑制細胞生長和遷移，誘導細胞凋亡，發揮抗血管生成作用。此外，血管內皮抑制素還可抑制腫瘤細胞表面血管內皮生長因子表達及蛋白水解酶活性，多靶點發揮抗血管生成作用。重組人血管內皮抑制素（recombinant?human?endostatin,?rh-ES）比血管內皮抑制素具有更高的純度與穩定性，抗血管生成活性更強，已經應用于臨床抗腫瘤。但由于rh-ES對機體正常血管與腫瘤新生血管作用缺乏特異性，單純靜脈注射給藥，腫瘤局部藥物濃度低，抗腫瘤作用有限，且存在不良反應。此外，由于rh-ES半衰期短，需每天靜脈給藥，患者依從性差。

生物蛋白膠由動物血提取的纖維蛋白原、凝血酶、鈣離子等多種成分組成，模擬人體凝血機制的最后階段，混合后所形成的蛋白凝膠具有止血、粘合、封閉傷口等作用，已經應用于臨床。研究還發現，生物蛋白膠的纖維網狀結構類似一個貯藥庫，是一種良好的藥物控緩釋載體。生物蛋白膠在體內隨著纖溶酶的激活，逐漸溶解吸收。此外，采用生物蛋白膠制備控緩釋藥物，只需將藥物與膠體溶液混勻后注射即可，無需使用有機溶劑，對蛋白質藥物活性無不良影響。采用生物蛋白膠為載體制備重組人血管內皮抑制素控緩釋制劑可保持藥物的生物活性，并且對機體無毒副作用。

控緩釋藥物腫瘤內注射治療可明顯提高腫瘤局部藥物濃度，進而提高抗腫瘤效果，并且明顯減少給藥次數，操作方便。但近年來研究表明，控緩釋藥物腫瘤內注射后，部分藥物釋放后被吸收進入血液循環。因此，使最大限度的藥物保留在腫瘤局部是提高抗腫瘤療效，減輕毒副作用的關鍵。血管內皮抑制素作用的主要靶點位于血管內皮細胞，腫瘤內注射rh-ES生物膠，只有當藥物釋放并且進入血液循環才能發揮抗血管生成作用。但進入血液循環的藥物將很快隨血流到達全身，實際能保留在腫瘤局部，作用于血管的藥物量極少，抗腫瘤血管生成作用有限。

發明內容

本發明的目的是提供一種載重組人血管內皮抑制素的生物膠制劑及其在制備超聲聯合微泡造影劑產生的生物效應介導下抑制腫瘤血管生成藥物中的應用。

本發明的目的是這樣實現的，所述的一種超聲生物效應介導的重組人血管內皮抑制素控釋制劑，由下述方法制備而成，取2mg重組人血管內皮抑制素，加入1ml含纖維蛋白原濃度為50mg/ml的醫用生物蛋白膠的主體膠溶液，混勻，然后與1ml含400IU凝血酶的催化劑溶液混合，形成載藥生物膠；將載藥生物膠置于10ml濃度為0.01mol/L、pH為7.2且含0.2mg/mlNaN₃的磷酸鹽緩沖液中，于37℃恒溫搖床，以80次/分速度震蕩，進行體外釋放，ELISA測定載藥生物膠釋放藥物量，載藥生物膠在體外較平穩釋放重組人血管內皮抑制素，2h釋放21.5%，5天累積釋放藥物量達89.7%；超聲輻照明顯促進生物膠釋放藥物的速度，具有控制藥物釋放的效果。

本發明所述的重組人血管內皮抑制素生物膠制劑在制備超聲聯合微泡造影劑產生的生物效應介導下抑制腫瘤血管生成藥物中的應用。

超聲輻照生物組織可產生熱效應、機械效應、空化效應等，這些物理效應在體內蓄積到一定程度時，局部組織溫度升高、血管壁及細胞膜通透性增高，即超聲生物效應。同時，超聲輻照產生的物理效應可控制緩釋制劑的釋放速率，尤其是在體凝膠的藥物釋放速度，達到定點定時控制藥物釋放的效果。大量研究表明，超聲波輻照擊破載藥微泡可明顯增強超聲生物效應，使直徑≤7μm?的微血管破裂，內皮細胞間隙增寬，細胞膜通透性增大，局部組織微循環障礙。

本發明的優點為：本發明采用生物蛋白膠包載重組人血管內皮抑制素制備載藥生物膠制劑，無毒副作用，腫瘤內注射后，通過超聲波輻照產生的生物效應控制藥物釋放速度，使緩釋制劑達到控釋的效果，可定點定時定量釋放藥物。通過超聲輻照微泡造影劑使腫瘤局部血管內皮細胞間隙擴大，被控制釋放的藥物可大量滲透在微血管內。超聲輻照微泡造影劑產生的強大生物效應，使腫瘤局部微血管閉塞，循環障礙，滲透到血管內的藥物可長時間保留在腫瘤局部血管內，直接作用于血管內皮細胞。此外，腫瘤局部血循環障礙，血中纖維蛋白溶解酶進入腫瘤局部量明顯減少，生物蛋白膠的降解速度減慢，可達到更持久的控緩釋效果，抑瘤率達到53.2%，是rh-ES生物膠瘤內注射組的5倍左右，有明顯的效果。

附圖說明