[發(fā)明專利]蔥葉凝集素重組蛋白、其編碼多核苷酸、引物及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201280070840.4
• 申請(qǐng)日: 2012-12-17
• 公開（公告）號(hào): CN104302769A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 普拉丹優(yōu)納·庫馬爾·辛格;普里提·拉伊;拉赫爾·辛格;桑托什·庫馬爾·烏帕德亞;沙拉德·紹拉巴;哈爾帕·辛格;普拉韋恩·錢德拉·維爾馬;錢德拉謝卡爾·克里希納帕;拉凱什·圖利
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 科學(xué)與工業(yè)研究會(huì)
• 主分類號(hào): C12N15/29
• 分類號(hào): C12N15/29;C12N15/11;C12N15/70;C07K14/42;A01P7/04
• 代理公司: 北京同立鈞成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11205
• 代理人: 劉洋

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種蔥(Allium?fistulosum)葉凝集素(AFAL)重組蛋白、其編碼多核苷酸、引物，及其制備方法，所述蔥葉凝集素(AFAL)蛋白具有殺蟲活性和血細(xì)胞凝集活性。本發(fā)明尤其涉及對(duì)可應(yīng)用于血細(xì)胞凝集和昆蟲防治的蔥葉凝集素(AFAL)的核酸序列(afal)編碼。

背景技術(shù)

植物凝集素，也被稱為“凝集素”，是糖結(jié)合蛋白的異質(zhì)組(heterogeneous?group)，其能夠可逆地結(jié)合單糖和/或復(fù)合碳水化合物(Van?Damme等人1998；CRC?Crit?Rev?Plant?Sci?17:575–692)。它們?cè)诜肿咏Y(jié)構(gòu)、糖結(jié)合特異性和時(shí)空調(diào)節(jié)方面表現(xiàn)出明顯的異質(zhì)性。甘露糖結(jié)合凝集素廣泛存在于高等植物中，由于其具有識(shí)別高甘露糖型聚糖的能力，因而能發(fā)揮顯著的對(duì)微生物病原體和植物捕食者的防御作用(Van?Damme等人1998,1998,CRC?Crit?Rev?Plant?Sci?17:575–692；Van?Damme等人2004?Trends?Plant?Sci?9:484-9)。來自大蒜葉[大蒜(Allium?sativum)葉凝集素(ASAL)]的甘露糖接合凝集素是25kDa同型二聚體蛋白，在結(jié)構(gòu)上和進(jìn)化上都與雪花蓮(Galanthus?nivalis)凝集素(GNA)相關(guān)(Smeets等人1997a,Plant?Mol?Biol?35:531–535；Van?Damme等人1992,.Eur?J?Biochem?206:413–420)。ASAL的一些生物特性是-(1)它易于凝集兔紅細(xì)胞，但不影響人體紅細(xì)胞(Bandhopadhyay等人2001,Plant?Sci.161:1025–1033；Smeets等人1997a,Plant?Mol?Biol?35:531–535；)，(2)它具有對(duì)MT-4細(xì)胞中逆轉(zhuǎn)錄病毒(HIV1和HIV2)誘導(dǎo)的細(xì)胞病變的抑制作用(Smeets等人1997b,Plant?Mol?Biol?33:223–234)，以及(3)它對(duì)同翅目(Homoptera)、鱗翅目(Lepidoptera)和鞘翅目(Coleoptera)一系列昆蟲具有毒性(生長(zhǎng)抑制性)。由ASAL抑制的一些重要的害蟲有蚜蟲[菜蚜(mustard?aphid)，桃蚜(peach?potato?aphid)、煙蚜(tobacco?aphid)(Bandhopadhyay等人2001,Plant?Mol?Biol?33:223–234?Hossain等人2006,Crop?Sci?46:2022-2032；Smeets等人1997a,Plant?Mol?Biol?35:531–535)、棉紅蝽(red?cotton?bug)(Bandhopadhyay等人2001,Plant.Mol.Biol.33:223–234)、褐飛虱(brown?plant?hopper)、大青葉蟬(green?leaf?hopper)(Saha等人2006,Plant?Mol.Biol.62:735-52)和衣蛾(cotton?leaf?worm)(Sadeghi?et?al.2008,Transgenic?Res.17:9-18)。雖然對(duì)凝集素的殺蟲作用的確切機(jī)制尚未完全了解，但是已提出了三種不同的作用方式-(1)該凝集素與中腸的圍食膜(peritrophic?matrix)結(jié)合，抑制營養(yǎng)的吸收(Harper等人1998,Tissue?Cell?30:166–176)，(2)與中腸的上皮細(xì)胞上的糖蛋白結(jié)合并破壞組織的完整性(Powell等人1998,J?Insect?Physiol.44:529–539；Sauvion等人2004,J?Insect?Physiol.50:1137–1150)，以及(3)與昆蟲口部的感覺感受器的碳水化合物部分結(jié)合，破壞膜的完整性并干擾昆蟲的食物檢測(cè)能力(Murdock等人2002,J?Agric?Food?Chem.50:6605–6611)。所有這些機(jī)制導(dǎo)致昆蟲攝取食物或吸收營養(yǎng)物質(zhì)的能力降低，從而導(dǎo)致發(fā)育遲緩和過早死亡。

美國專利5,545,820(Gatehouse,等人,1996)公開了衍生自石蒜科(Amaryllidaceae)或蔥科(Alliaceae)的具有特異性甘露糖結(jié)合能力的凝集素在防治害蟲中的應(yīng)用。WO/1992/002139涉及衍生自石蒜科或蔥科(Alliaceae)的具有特異性甘露糖結(jié)合能力的凝集素在防治害蟲中的用用以及表達(dá)這類凝集素的轉(zhuǎn)基因植物的培植。美國專利5407454涉及對(duì)許多常見農(nóng)作物害蟲具有殺蚴活性的精選植物凝集素。轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲性是由于在植物所有細(xì)胞中插入了殺蚴凝集素基因。