[發明專利]白細胞的分類計數方法、白細胞分類試劑盒及白細胞分類試劑

有效

• 申請號: 201280016125.2
• 申請日: 2012-04-18
• 公開（公告）號: CN103460041A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 大塚佐緒里;八町和樹;水上利洋;小國振一郎
• 申請（專利權）人: 希森美康株式會社
• 主分類號: G01N33/49
• 分類號: G01N33/49;G01N15/14;G01N21/49;G01N21/64;C12Q1/02
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 羅菊華

【技術領域】

本發明涉及分類計數活體樣品中的白細胞的方法。本發明還步及用于分類計數活體樣品中的白細胞的白細胞分類試劑盒及白細胞分類試劑。

【背景技術】

正常的白細胞通常被分類為淋巴細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞及嗜堿性粒細胞的5種。在正常的末梢血中，這些的血細胞各自以一定的比例存在。但是，當受試者存在疾病時，特定的血細胞數增加或減少。所以，在臨床檢查的領域，通過進行白細胞的分類計數，可得對疾病的診斷極其有用的信息。

在造血器腫瘤、病毒感染癥等的疾病中，出現在正常的末梢血液中不存在的細胞。例如，在急性的白血病中，在末梢血液中出現作為未成熟的白細胞的“母細胞（成髓細胞：myeloblast、成淋巴細胞：lymphoblast）”。另一方面，在病毒感染癥、藥物過敏等中，由抗原刺激而在末梢血液中出現作為活化的淋巴細胞的非典型淋巴細胞（atypical?lymphocyte）。從末梢血液中區別檢測非典型淋巴細胞和母細胞，在進行疾病的篩選或診斷中極其有用。

近年、市售應用流式細胞術的原理的各種的自動血細胞計數裝置。由那樣的裝置，可自動進行樣品中的血細胞的分類計數。另外，用于由自動血細胞計數裝置的測定的血細胞分類試劑也有市售。使用這樣的試劑用自動血細胞計數裝置測定待測樣品，在各自散點圖上的指定的區域出現檢測的各血細胞的信號。

所述技術中多少知道如上述一樣的血細胞分類試劑。例如，在專利文獻1中記載了可分類計數異常白細胞和正常白細胞的兩方的方法。在該方法中，使用將特異性地染色RNA的染色液，和含陽離子性表面活性劑及非離子性表面活性劑的溶血劑組合而成的試劑盒。另外，在專利文獻2記載了分類計數正常白細胞，并且檢測異常白細胞的方法。在該方法中，使用包含含有指定的熒光染料的染色液，和含陽離子性表面活性劑及非離子性表面活性劑的溶血劑的試劑。

【現有技術文獻】

【專利文獻】

專利文獻1:專利第4248017號公報

專利文獻2:美國專利申請第2009/0023129號

【發明內容】

【發明要解決的技術課題】

如上所述，在從受試者得到的待測樣品中，有除了正常白細胞之外，還包含母細胞及非典型淋巴細胞等異常白細胞的情況。

但是，在使用專利文獻1及專利文獻2的試劑的方法中，作為異常白細胞的母細胞及非典型淋巴細胞的信號均出現在散點圖上的大致相同的區域，所以有難以區別檢測母細胞和非典型淋巴細胞的情況。

本發明以提供可分類計數正常白細胞，并且能區別檢測母細胞和非典型淋巴細胞的白細胞的分類計數方法作為目的。本發明另外，以提供可分類計數正常白細胞，并且能區別檢測母細胞和非典型淋巴細胞的白細胞分類試劑盒及白細胞分類試劑作為目的。

【解決課題的技術方案】

在由使用以往的白細胞分類試劑的流式細胞儀的測定中，母細胞及非典型淋巴細胞的信號在散點圖上出現在出現正常淋巴細胞及正常單核細胞的信號的區域的近邊或與該區域重復的區域。本發明人考慮了，是否通過將出現正常淋巴細胞的信號的區域和出現正常單核細胞的信號的區域隔開，可分離異常白細胞的信號和正常白細胞的信號，從而可提高異常白細胞的檢測靈敏度。

從而，本發明人對于能隔開出現正常淋巴細胞的信號的區域和出現正常單核細胞的信號的區域的白細胞分類方法進行檢查。結果，令人驚訝地發現，通過使芳香族的有機酸的濃度和試劑的pH成為指定的組合，能提高異常白細胞的檢測精度，區別檢測母細胞和非典型淋巴細胞，從而完成本發明。

即，本發明提供白細胞的分類計數方法，其包括：

將活體樣品，染色核酸的第1試劑，用于使紅細胞溶血，給白細胞的細胞膜造成能透過上述熒光染料的程度的損傷的陽離子性表面活性劑及非離子性表面活性劑，以及含有20mM以上50mM以下的濃度的芳香族的有機酸的第2試劑混合而制備測定樣品的步驟；

向制備的測定樣品照射光，取得這時發生的散射光信息及熒光信息的步驟；及

基于取得到的散射光信息及熒光信息，將上述活體樣品中的白細胞分類，同時區別檢測母細胞和非典型淋巴細胞的步驟；

其中，

當上述第2試劑中的芳香族的有機酸的濃度是20mM以上、不足30mM時，上述第2試劑的pH是5.5以上6.4以下，

當上述第2試劑中的芳香族的有機酸的濃度是30mM以上50mM以下時，上述第2試劑的pH是5.5以上7.0以下。