[實用新型]一種核桃蛋白ELISA檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201220638881.6
• 申請日: 2012-11-28
• 公開（公告）號: CN202939176U
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 陳朝銀;方娟;趙聲蘭;葛鋒;劉迪秋
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型涉及一種核桃蛋白ELISA檢測試劑盒，具體是一種核桃蛋白含量檢測的酶聯免疫試劑盒，特別是檢測食品（如，核桃粉、乳）中核桃蛋白含量的酶聯免疫檢測(ELISA)試劑盒。

背景技術

近年來，隨著人民生活水平的提高，食品安全問題日益凸顯。“三聚氰胺事件”更使人們強化了非食品用添加劑的食品安全問題，但食用添加劑的不合法添加形勢日趨惡劣，如各種各樣蛋白飲品(粉、乳等)中魚龍混雜的蛋白原料添加，各種各樣的調制奶、酸奶、核桃乳、核桃粉、奶粉中添加大豆粉等，牛奶、黃牛奶、山羊奶、馬奶等的相互摻假問題，極大的影響了食品消費市場的安全和消費者的消費信心。因此，加強其檢驗方法的研究迫在眉睫。

?????目前蛋白質檢測方法主要包括：蛋白質電泳技術、液相色譜技術、生物質譜技術、近紅外光譜技術、免疫技術等。ELISA(Enzyme?Linked?Immunosorbent?Assay)是酶聯免疫吸附劑測定的簡稱，它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種酶免技術，ELISA檢測法具有操作簡便、快速、靈敏度高、特異性強、經濟等優點。國內已有利用大豆蛋白多克隆抗體ELISA方法測定火腿腸大豆蛋白含量，利用提純牛乳酪蛋白免疫試驗動物，獲得針對酪蛋白的多克隆抗體，建立了牛奶中牛奶蛋白質含量的ELISA檢測方法，具有良好的特異性、敏感性、重復性。但是核桃蛋白定量檢測和摻假檢驗的試劑盒仍是空白。?

發明內容

本實用新型所要解決的問題是提供一種小巧輕便的核桃蛋白ELISA檢測試劑盒，其操作簡便，檢測快速、準確、靈敏度高，成本低，穩定性好，可進行一次連續多個樣品中核桃蛋白含量的測定，減少了檢測樣本所需要的時間。?

???本實用新型核桃蛋白ELISA檢測試劑盒，包括盒體、盒內的一塊酶標板、一張蓋板膜、9瓶試劑、放試劑的下凹瓶位、一份說明書、一份質檢書，其中酶標板是采用96孔試劑板作為固相載體，9瓶試劑分別為陽性抗原溶液、抗體工作液、陰性血清、酶標二抗工作液、底物顯色液、終止液、洗滌液、封閉稀釋液、包被緩沖液，放試劑的下凹瓶位共9個，分別放置9瓶試劑，蓋板膜放置于酶標板上，說明書和質檢書用自封袋包裹放置于盒內。

????本實用新型所述盒體為硬紙盒；96孔的聚苯乙烯酶標板，放于真空鋁箔袋內，蓋板膜是塑料硬膜。

本實用新型所述9瓶試劑用不同大小、不同顏色的塑料瓶盛裝，陽性抗原溶液裝于綠色帽的透明PE塑料瓶，抗體工作液裝于紅色帽的透明PE塑料瓶內，陰性血清裝于白色帽的透明PE塑料瓶內，酶標二抗工作液裝于黃色帽的透明PE塑料瓶內，底物顯色液用黑色帽的黑色PE塑料瓶內，終止液、洗滌液、封閉稀釋液、包被緩沖液均用透明帽的白色?PE?塑料瓶內，下凹瓶位由塑料制成。

本實用新型所述酶標板為可拆或不可拆的固相載體，可拆酶標板是由外框支撐架及放置其上的可拆的12條或8條酶標反應微孔條組成，每個可拆裝酶標反應微孔條有8個或12個反應孔；蓋板膜大小與酶標板橫切面大小一致。

本實用新型所述陽性抗原溶液1瓶，10μl；酶標二抗工作液1瓶，1ml；陰性血清1瓶，50μl；抗體工作液1瓶，1ml；底物顯色液1瓶，10ml；終止液1瓶，10ml；洗滌液1瓶，30ml；封閉稀釋液1瓶，25ml，包被緩沖液1瓶，10ml，其中封閉稀釋液作為封閉液、抗體稀釋液、血清稀釋液。

本實用新型將9瓶試劑固定在放試劑的下凹瓶位中與酶標板、蓋板膜、說明書、質檢書一同封裝在硬紙盒內，以便于攜帶和運輸。每一個試劑盒中的試劑足夠進行96次測定(?包括標準分析孔)，既可進行一次連續多個樣品的檢測，也可以將板孔拆開多次檢測，將剩下酶標反應微孔條的放回鋁箔袋中用自封袋密封，這樣可以保證試劑盒檢測結果的準確性。檢測時，包被在酶標板上的標準品和樣品中的核桃蛋白可與后面加入的一抗結合，再加入酶標二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與樣本中所含核桃蛋白的含量成正相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中核桃蛋白含量，其操作簡便易行。?

????實驗顯示本試劑盒具有很高的靈敏度，標準曲線的檢測范圍在800ng/ml-25ng/ml，回收率范圍均在?85％～115％之間；且特異性較好，與其他植物堅果如，花生、大豆、芝麻均無交叉反應；相對于其他新霉素檢測方法，本試劑盒所需儀器較少，只需要酶標儀、離心機、振蕩器和微量加樣器等，同類實驗室一般均有配備，所需成本較低。?