[實用新型]從造血器官、血液標本中獲得干細胞的細胞處理試劑盒

有效

• 申請號: 201220577894.7
• 申請日: 2012-10-26
• 公開（公告）號: CN203333672U
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 李福生;盧磊磊;盧淼淼;盧晶晶
• 申請（專利權）人: 李福生;盧磊磊
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12M1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種用于從造血器官、血液標本中獲得干細胞的細胞處理試劑盒。?

背景技術

成體干細胞是另外一類具有修復、再生、替代能力的未分化細胞類型，通常位于特定的小生境內，在受到外界損傷后，其會動員或者產生新的干細胞，通過增殖、分化的方式形成新的功能細胞，從而調節組織和器官細胞數量保持動態平衡。成體干細胞的多能性特點首先在骨髓中得到的成體干細胞得以發現。造血干細胞是目前研究的最為詳盡的成體干細胞之一，在過去近40年里一直是干細胞領域研究的主題，它們在體內進行自我更新的細胞分裂，在單細胞水平分化為所有的造血成份，并在機能上使得重度骨髓抑制的動物和人的骨髓得以恢復。?

目前，人們的研究發現造血干細胞主要來自于骨髓、臍帶血、外周血、經血，造血干細胞已被用于移植治療多種血液病、糖尿病及并發癥、某些惡性實體腫瘤、免疫缺陷等疾病的有效措施之一。動物實驗及臨床應用方面已證明造血干細胞移植對重建或改善骨髓造血功能有較好療效。干細胞在臍帶血的比例相對比較高，約1.5％左右，骨髓中的比例非常低，約0.1～0.5％，而造血干細胞在外周血中的比例更低，研究者采用多個分子表面標志，如使用Thy-l^low或FLK2^-Lineage^-Sca-l⁺c-Kit⁺可用于分選出造血干細胞群(ChristemsenJL等，PNAS，2001.98：14541-14546；UchidaN等，Experimental?hematology，1996.24：649-659)，用CD14⁺免疫磁性分離的方法從外周血篩選新的干細胞群(PCT/055950干細胞的提純、識別及用途)；采用CD34、CD133作為造血干細胞的標志物用于識別及分選造血干細胞或祖細胞(Civin等，J?Immunol?1984；133：157-165；Kobari?L等，J?Hematother?Stem?Cell?Res.2001；10：273-281)。又有研究者發現分化程度較低的干/祖細胞通常表達一些ATP結合轉運蛋白(ATP-binding?cassette，ABC)，細胞常利用ATP能量把外來的有毒物質從細胞內排出，以達到保護自身的目的，被稱為側群篩選法(side?population，SP)。早期Goodell等(Goodell等，J?Exp?Med，1996.183(4)：1796-1806)研究發現，當用Hoechst33342對骨髓細胞進行染色后，造血干細胞具有很強的排出染液的能力。?

然而，最近的證據表明，CD34在細胞膜上的表達不總是與干細胞活性相關，已有研究發現在人中獲得的干細胞缺乏CD34表達，但具有完全的重建能力的高度靜止的干細胞群體(Dao等，Leukemia?2000；14：773-776)，進一步顯示，與缺乏這些表型標志物的成體骨髓和臍帶血來源的干細胞相比，造血祖細胞的多能分化潛能有限(Jiang?YY等，Nat?Cell?Biol.2004；6：532-539)，而側群篩選法雖然有其價值，但不足之處是，實驗重復性比較差，當從實體組織中篩選出SP細胞后，由于獲得活細胞的能力有限，當此類細胞進行移植后可能影響他們的重塑能力。?

因此，人們一直關注發現其他方法，以替代或補充現有的分離富集干細胞和原始祖細胞的群體。?

如申請號為CN200610114475.9的中國專利，提供了一種用于分離骨髓單個核細胞的試劑盒，雖然該試劑盒使用方便，成本低廉的優點，但其缺點在于：分離的干細胞其數量極少不足以臨床有效治療使用。申請號為CN200610106875.5的中國專利，提供了一種有核細胞體外分離試劑盒及其應用方法及申請號為200810089682.2的中國專利，提供了一種分離單個核細胞的方法和裝置，但經此分離后的細胞絕大多數為淋巴細胞，這樣導致細胞中實際能用于治療的干細胞占少數，極大的影響臨床療效，增加患者的經濟負擔。再如申請號為CN200710137781.9的中國專利，提供了一種骨髓臍帶血干細胞體外分離試劑盒及其應用方法，其缺點在于使用雞尾酒lin抗體，導致成本大幅度增加，一方面增加患者的經濟負擔，使其難于接受細胞治療，且lin抗體給隨后的細胞洗滌帶來了困難，很難確定其治療后在人體內發生的變化。?