[實用新型]新霉素檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201220560765.7
• 申請日: 2012-10-30
• 公開（公告）號: CN202903800U
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何方洋;余厚美;劉福林;王建霞;何麗霞;蒲小容;段盈盈
• 申請（專利權(quán)）人: 北京勤邦生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

（一）技術(shù)領(lǐng)域：本實用新型涉及一種新霉素檢測試劑盒，特別是檢測動物源性食品中新霉素殘留量的試劑盒。

（二）背景技術(shù)：新霉素是氨基糖甙類抗生素,?被廣范應用于動物疾病的治療，由于其具有神經(jīng)毒性和腎臟毒性，在動物食品中的殘留會影響人類健康，歐美國家及我國均要求其限量使用。

新霉素殘留量的常規(guī)檢測方法主要有薄層色譜（TLC）、高效液相色譜（HPLC）、毛細管電泳（CE）等，由于復雜的儀器設(shè)備和繁瑣的過程以及對檢驗人員的高技能要求，不適合現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本的篩查。

（三）實用新型內(nèi)容：本實用新型提供一種小巧輕便的新霉素檢測試劑盒，其操作簡便，檢測靈敏度高，成本低，可進行一次連續(xù)進行多個樣品中新霉素殘留量的測定，減少了檢測樣本所需要的時間。

新霉素檢測試劑盒，包括固相載體、放試劑的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的試劑瓶，固相載體上設(shè)有微孔條，微孔條包括微孔、包被層；試劑瓶包括裝有新霉素單克隆抗體溶液的試劑瓶、裝有辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠抗抗體的試劑瓶。

所述包被層由新霉素偶聯(lián)抗原組成。

所述試劑盒還包括6瓶裝有新霉素標準液的試劑瓶，2瓶裝有底物顯色液的試劑瓶，1瓶裝有終止液的試劑瓶，1瓶裝有洗滌液的試劑瓶，1瓶裝有緩沖液的試劑瓶。

所述固相載體由96孔聚苯乙烯試劑板組成。

每一個試劑盒中的試劑足夠進行96次測定，既可進行一次連續(xù)多個樣品的檢測，也可以將板孔拆開多次檢測。檢測時，樣本中的新霉素將和微孔條包被層的新霉素偶聯(lián)抗原競爭新霉素單克隆抗體，加入辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠抗抗體后，用底物顯色液顯色，樣本吸光度值與樣本中新霉素的殘留量成負相關(guān)，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中新霉素殘留量。

經(jīng)實驗表明本試劑盒具有很高的靈敏度：檢測靈敏度為：0.5μg/L。相對于其他新霉素檢測方法，本試劑盒所需儀器較少，同類實驗室一般均有配備，所需成本較低。

本實用新型的有益效果是：能快速、簡便、靈敏、準確地用于動物源性食品中新霉素殘留量的檢測。

（四）附圖說明：

圖1本實用新型試劑盒的固相載體一列微孔條圖。

圖2?本實用新型固相載體圖。

圖3?本實用新型盒體、下凹瓶位結(jié)構(gòu)示意圖；

（五）具體實施方式：

如圖1至圖3所示，新霉素檢測試劑盒，盒體1內(nèi)具有固定模具形成的下凹瓶位2，下凹瓶位用于放置裝有溶液的試劑瓶，96孔聚苯乙烯試劑板組成的固相載體3，固相載體的的微孔條4包括微孔5和包被層6，包被層由新霉素偶聯(lián)抗原組成，試劑瓶包括裝有新霉素單克隆抗體溶液的試劑瓶、裝有辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠抗抗體的試劑瓶。

為了更有利于檢測新霉素殘留的檢測，試劑盒還可以包括有6瓶裝有新霉素標準液的試劑瓶，2瓶裝有底物顯色液的試劑瓶，1瓶裝有終止液的試劑瓶，1瓶裝有洗滌液的試劑瓶，1瓶裝有緩沖液的試劑瓶。

試劑盒的試劑瓶內(nèi)的具體成分如下：

（1）新霉素單克隆抗體工作液1瓶/7ml；

（2）新霉素標準品溶液1ml/瓶，濃度分別為0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、13.5μg/L、40.5μg/L；

（3）辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠抗抗體工作液7ml/瓶；

（4）底物顯色液，分別為底物顯色A液，底物顯色B液，底物顯色液A液為過氧化脲7ml/瓶，底物顯色液B液為四甲基聯(lián)苯胺7ml/瓶；

（5）終止液7ml/瓶；

（6）緩沖液50ml/瓶，為含有1%甲醇、0.01-0.05mol/L磷酸鹽緩沖液。使用時2倍稀釋。

（7）洗滌液40ml/瓶，為含有0.8%-1.2%吐溫-20、0.5%疊氮化鈉、0.01mol/L磷酸鹽緩沖液。使用時20倍稀釋。

試劑盒中用到的主要材料的制備方法：

新霉素偶聯(lián)抗原的制備

（1）新霉素偶聯(lián)抗原的制備

將新霉素與血藍蛋白通過碳化二亞胺法偶聯(lián)得到新霉素偶聯(lián)抗原。

新霉素單克隆抗體的制備

（1）動物免疫

將免疫原（新霉素與卵清蛋白通過碳化二亞胺法偶聯(lián)得到）注入到Balb/c小鼠體內(nèi)，免疫劑量為150μg/只，使其產(chǎn)生多克隆抗體血清。

（2）細胞融合和克隆化

小鼠血清測定結(jié)果較高后，取其脾細胞，按9:?1比例與SP2/0骨髓瘤細胞融合，采用間接競爭ELISA測定細胞上清液，篩選陽性孔。利用有限稀釋法對陽性孔進行克隆化，直到得到分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株。