[實(shí)用新型]一種檢測(cè)水產(chǎn)品中呋喃它酮代謝物的膠體金試劑板

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201220302017.9
• 申請(qǐng)日: 2012-06-21
• 公開（公告）號(hào): CN202649214U
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱曉華;耿雪冰;張素青;張宣偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州南開日新生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)水產(chǎn)品中呋喃它酮代謝物的膠體金試劑板，具體涉及一種檢測(cè)呋它酮代謝物的免疫膠體金快速檢測(cè)試劑板。

背景技術(shù)

呋喃它酮是一種硝基呋喃類藥物，具有非常好的抗菌作用，在臨床上主要用于雞白痢、雞大腸桿菌病、雞球蟲病等各種腸道感染性疾病的治療及用作豬、禽類和水產(chǎn)促生長(zhǎng)的添加劑。但有關(guān)研究證明，呋喃它酮及其代謝物具有相當(dāng)大的毒性和副作用，能誘導(dǎo)有機(jī)體基因突變及致畸胎，且能誘發(fā)癌癥。歐盟早在1990年就頒布2377/90/EEC條例，將硝基呋喃類藥物及其代謝物列為A類禁用藥，規(guī)定其在動(dòng)物源性食品中的最高殘留量為1.0μg/kg。1995年起歐盟、日本、美國(guó)等開始禁止這類抗菌劑在食用的畜禽及水產(chǎn)動(dòng)物中使用，并嚴(yán)格執(zhí)行對(duì)輸入的食用魚、蝦及禽類進(jìn)行殘留檢測(cè)。中國(guó)農(nóng)業(yè)部2002年2月發(fā)布‘食品動(dòng)物禁用的獸藥及其他化合物清單》中，明文禁止在所有食品動(dòng)物的所有用途中使用硝基呋喃類藥物。但是，由于其價(jià)格便宜，藥效好，在很多國(guó)家還在繼續(xù)違規(guī)使用。為了保障人民健康及擴(kuò)大與世界各國(guó)動(dòng)物源性食品貿(mào)易往來(lái)，必須對(duì)動(dòng)物源性食品中呋喃它酮進(jìn)行檢測(cè).由于呋喃它酮在體內(nèi)很快就能被代謝，而在組織中結(jié)合的代謝產(chǎn)物(AMOZ)則能存留較長(zhǎng)的一段時(shí)間，所以藥殘監(jiān)測(cè)部門經(jīng)常以檢測(cè)其代謝產(chǎn)物一AMOZ為手段達(dá)到檢測(cè)呋喃它酮?dú)埩舻哪康摹?/p>

目前，呋喃它酮代謝物(AMOZ)檢測(cè)方法主要有微生物法、色譜法、免疫分析法等。微生物法是測(cè)定抗生素殘留的經(jīng)典方法，具有前處理簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、批量大等優(yōu)點(diǎn)，但精確度、準(zhǔn)確度和特異性不高。色譜法應(yīng)用較普遍，精確度和靈敏度高，但因其流程繁瑣、設(shè)備昂貴、檢測(cè)速度慢等原因，很難實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和普及推廣。酶聯(lián)免疫檢測(cè)法的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，該法精確、靈敏，檢測(cè)時(shí)間大大縮短，但是ELISA法中酶的活性易受反應(yīng)條件影響，由此易造成測(cè)定結(jié)果重復(fù)性較差。此外ELISA試劑壽命短，因此需要低溫保藏。

基于抗原抗體特異性反應(yīng)建立起來(lái)的免疫學(xué)測(cè)定方法靈敏度較高，特異性強(qiáng)，試樣預(yù)處理簡(jiǎn)單，分析時(shí)間短，使用方便。因此，在現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和基層的大規(guī)模篩選檢測(cè)中，免疫學(xué)檢測(cè)方法更實(shí)際。

膠體金免疫層析法是在免疫滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立的一種簡(jiǎn)易快速的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，除了具備酶聯(lián)免疫法的諸多優(yōu)點(diǎn)外，還克服了酶聯(lián)免疫法的一些不足。該方法將反應(yīng)所需要的原料的全部或大部分均已整合到試劑中，反應(yīng)通常只需數(shù)分鐘，測(cè)試結(jié)果以肉眼可見的顯色條帶來(lái)判斷。具有簡(jiǎn)便快速、操作簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、不需要額外設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)。

實(shí)用新型內(nèi)容

本實(shí)用新型針對(duì)檢測(cè)需求，研制開發(fā)一種檢測(cè)限符合要求，重現(xiàn)性好，檢測(cè)時(shí)間短，適合現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，技術(shù)產(chǎn)品或儀器設(shè)備成本較低，運(yùn)行費(fèi)用低的快速檢測(cè)試劑。

本實(shí)用新型試劑板應(yīng)用層析式抗體免疫競(jìng)爭(zhēng)原理，通過(guò)抗原和金標(biāo)抗體反應(yīng)顯色，特異性檢測(cè)水產(chǎn)樣品中的呋喃它酮代謝物殘留水平。檢測(cè)樣品包括魚、蝦等水產(chǎn)品。如果樣品溶液中含有呋喃它酮代謝物殘留，呋喃它酮代謝物先和膠體金顆粒上的抗體反應(yīng)，因此當(dāng)膠體金顆粒隨樣品溶液擴(kuò)散至檢測(cè)線時(shí)，膠體金顆粒上抗體的活性位點(diǎn)因被樣品溶液中的呋喃它酮代謝物藥物占據(jù)而無(wú)法與檢測(cè)線上呋喃它酮代謝物特異性抗原結(jié)合；當(dāng)樣品中的呋喃它酮代謝物含量超過(guò)試劑板檢出限時(shí)，試劑板上的檢測(cè)線顯色較控制線淺甚至無(wú)顯色，判定為陽(yáng)性。反之，當(dāng)樣品中呋喃它酮代謝物含量在試劑板檢出限以下或無(wú)殘留時(shí)，試劑板上的檢測(cè)線顯色與控制線相近或偏深，判定為陰性。

本實(shí)用新型試劑板由上下兩塊塑料模板和背襯組成，背襯上依次緊密粘貼著樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。相鄰各部分間有1-2mm的重疊以保證層析作用從樣品墊到吸水墊部位的順利進(jìn)行。

膠體金結(jié)合墊上包被有抗呋喃它酮代謝物單克隆抗體與膠體金的結(jié)合物；硝酸纖維素膜上從樣品墊到吸水墊方向依次包被有呋喃它酮代謝物-載體蛋白偶聯(lián)物和羊抗鼠IgG，分別作為檢測(cè)線和控制線。偶聯(lián)呋喃它酮代謝物的載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白等。

本實(shí)用新型試劑板的各部分組成成分和功能如下：

塑料模板，起固定背襯和標(biāo)示各功能區(qū)(加樣孔、檢測(cè)區(qū)、控制區(qū))的作用。

背襯，由一面涂有不干膠的不吸水韌性材料制成，起固定支撐試劑板其他組成部分的作用。

樣品墊，由玻璃纖維制成，起吸收樣品溶液和緩沖樣品溶液pH值的作用。

膠體金結(jié)合墊，由聚酯膜制成，其上有抗呋喃它酮代謝物單克隆抗體與膠體金顆粒的結(jié)合物，為樣品溶液中有效成分和金標(biāo)抗體反應(yīng)提供場(chǎng)所。