[實用新型]一種檢測畜肉中萊克多巴胺的免疫膠體金試劑板

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201220270617.1
• 申請日: 2012-06-04
• 公開（公告）號: CN202814979U
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設計）人: 王森;張少恩;桑麗雅
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州南開日新生物技術有限公司;紹興市農(nóng)業(yè)科學研究院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型涉及一種檢測畜肉中萊克多巴胺的免疫膠體金試劑板，具體涉及一種檢測畜肉中萊克多巴胺的免疫膠體金快速檢測試劑板。?

背景技術

萊克多巴胺(Ractopamine)與鹽酸克倫特羅(瘦肉精)同屬β-興奮劑類藥物中的一員，對人體危害性同樣很大。而且本品能夠顯著提高肥育豬的生產(chǎn)性能，改善飼料利用效率，顯著提高豬的瘦肉率，在豬體內(nèi)代謝較克倫特羅迅速更加不易檢測。美國FDA于2003年7月份批準該藥品僅作為飼料添加劑在養(yǎng)豬生產(chǎn)中使用，目前我國農(nóng)業(yè)部和別的國家全面禁止該物質(zhì)的使用。隨著克倫特羅等藥物被世界各國禁止作為飼料添加劑使用，萊克多巴胺的非法使用日趨嚴重。但其檢測方法與克倫特羅等其它β-興奮劑相比較為落后。因此建立動物食品中萊克多巴胺的殘留檢測方法迫在眉睫。國外在對萊克多巴胺的檢測方面已經(jīng)進行了較多的研究但是國內(nèi)尚未見有關這方面的報道。?

萊克多巴胺屢禁不止的原因還因為目前的檢測方法主要為高效液相色譜β-質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS)和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)。這些檢測方法不能適應市場監(jiān)督需要快速、簡便、價廉的要求。免疫分析法常用的有酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和免疫層析法(GICA)。ELISA法具有檢測量大，操作相對簡單等優(yōu)點，越來越多地被用于動物性食品中萊克多巴胺殘留的檢測，但是ELISA法整個操作時間仍需要1-2h，且需用到特殊的儀器設備，具有一定局限性。?

膠體金免疫層析法是二十世紀九十年代興起的一項新型的快速免疫學檢測技術。該方法將反應所需要原料的全部或大部分整合到試劑中，可在5-10min內(nèi)完成對樣品中β-興奮劑類藥物的定性和半定量測定，具有簡單、快速、靈敏度高等特點，無須儀器設備配合測定，檢測既可在實驗室中進行，也可在養(yǎng)殖場等進行實地測定。?

實用新型內(nèi)容

本實用新型針對檢測需求，研制開發(fā)一種檢測限符合要求，重現(xiàn)性好，檢測時間短，適合現(xiàn)場快速檢測，技術產(chǎn)品或儀器設備成本較低，運行費用低的快速檢測試劑。?

本實用新型試劑板應用層析式抗體免疫競爭原理，通過抗原和金標抗體反應顯色，特異性檢測畜肉中的萊克多巴胺殘留水平。如果樣品溶液中含有萊克多巴胺殘留，萊克多巴胺先和膠體金顆粒上的抗體反應，因此當膠體金顆粒隨樣品溶液擴散至檢測線時，膠體金顆粒上抗體的活性位點因被樣品溶液中的萊克多巴胺藥物占據(jù)而無法與檢測線上萊克多巴胺特異性抗原結(jié)合；當樣品中的萊克多巴胺含量超過試劑板檢出限時，試劑板上的檢測線顯色比控制線淺或無顯色，判定為陽性。反之，當樣品中萊克多巴胺含量在試劑板檢出限以下或無殘留時，試劑板上的檢測線顯色比控制線深或一樣深，判定為陰性。?

本實用新型試劑板由上下兩塊塑料模板和背襯組成，背襯上依次緊密粘貼著樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。相鄰各部分間有1-2mm的重疊以保證層析作用從樣品墊到吸水墊部位的順利進行。?

膠體金結(jié)合墊上包被有抗萊克多巴胺單克隆抗體與膠體金的結(jié)合物；硝酸纖維素膜上從樣品墊到吸水墊方向依次包被有萊克多巴胺-載體蛋白偶聯(lián)物和羊抗鼠IgG，分別作為檢測線和控制線。偶聯(lián)萊克多巴胺的載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍蛋白等。?

本實用新型試劑板的各部分組成成分和功能如下：?

塑料模板，起固定背襯和標示各功能區(qū)(加樣孔、檢測區(qū)、控制區(qū))的作用。?

背襯，由一面涂有不干膠的不吸水韌性材料制成，起固定支撐試劑板其他組成部分的作用。?

樣品墊，由玻璃纖維制成，起吸收樣品溶液和緩沖樣品溶液pH值的作用。?

膠體金結(jié)合墊，由聚酯膜制成，其上有抗萊克多巴胺單克隆抗體與膠體金顆粒的結(jié)合物，為樣品溶液中有效成分和金標抗體反應提供場所。?

硝酸纖維素膜，從樣品墊到吸水墊方向上依次噴有檢測線和控制線，將反應結(jié)果以肉眼可見的顏色表征出來。?

吸水墊，由濾紙制成，將反應過程中多余的溶液吸收。?

本實用新型試劑板具有如下有益效果：?

(1)特異性好。本實用新型試劑板對萊克多巴胺的交叉反應率為100％，對如鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇等β-興奮劑類藥物的交叉反應率均低于1％。可見，本實用新型試劑板對萊克多巴胺反應具有高度專一性。?

(2)靈敏度高。本實用新型試劑板對樣品中萊克多巴胺的檢出限為5ppb(樣品制備方法簡單)、1ppb(樣品制備方法復雜)，試劑板適用于各類企業(yè)及檢測機構(gòu)。?