[實用新型]一種用于PMA/EMA與細菌死細胞DNA分子共價交聯裝置

有效

• 申請號: 201220228104.4
• 申請日: 2012-05-21
• 公開（公告）號: CN202626164U
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 班付國;高延玲;張發旺;周紅霞;劉宏偉;趙全成;梁軍;張影;曲登峰;王世山;朱松波;高小玲;雷東風;彭峰;陳陽;黃京燕;馬俊;焦玉萍;李金磊;董鵬;常守海;姚德新
• 申請（專利權）人: 河南省獸藥監察所
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00
• 代理公司: 鄭州紅元帥專利代理事務所(普通合伙) 41117
• 代理人: 王瑞麗

技術領域

　　本實用新型涉及一種用于PMA/EMA與細菌死細胞DNA分子共價交聯裝置。

背景技術

實時PCR技術被應用多年，用于檢測食品、飼料或環境中的病原微生物。然而，目前的PCR檢測方法容易出現假陽性的結果，這造成了巨大的浪費和不必要的召回事件的發生。出現這種結果的原因是PCR技術跟其它的DNA法一樣，均不能將活的跟死的細菌分開，導致了PCR技術提供了錯誤的結果。

為了克服以上PCR技術的弱點，避免假陽性結果的出現，將單疊氮溴化乙錠染料結合PCR技術對試樣進行處理。單疊氮溴化乙錠進入死的細菌體內后與DNA分子進行結合，單疊氮溴化乙錠染料使得細菌在染色后不能被溶解，相反的是，染料不能穿透活細胞，這使得檢測人員可以利用這種改進的PCR技術很容易的區分活的及死的細菌，從而避免假陽性結果的出現。

實用新型內容

由鑒于此，本實用新型的目的是提供一種用于PMA/EMA與細菌死細胞DNA分子共價交聯裝置，克服了現有技術的不足，操作方便、光照均勻并可進行紫外殺菌。

為了實現上述目的，本實用新型采用以下技術方案：

一種用于PMA/EMA與細菌死細胞DNA分子共價交聯裝置，包括箱體，其中，所述箱體上設有活動門、鹵素燈開關、紫外燈管開關和總電源開關，所述箱體內頂部設有鹵素燈，箱體兩側內壁上分別設置有至少一個紫外燈管。

進一步，所述的紫外燈管為兩個。

進一步，所述箱體上還設有可視窗口。

進一步，所述鹵素燈為500瓦。

本實用新型的有益效果為：

本實用新型可用于永久性修飾細菌死細胞的DNA分子，阻斷DNA分子的聚合酶鏈式反應，從而有效區分樣品中細菌的死活狀態，降低PCR檢測樣品中致病菌的假陽性率。本實用新型可提供約20000lux的強光，進而使PMA與菌懸液混合均勻后在本裝置內進行光照交聯，PMA所帶的光敏性疊氮基團轉化為高活性的氮賓自由基，并與結合位點附近的任意碳氫化合物反應形成穩定的共價氮碳基，致使死細胞DNA分子的永久修飾，最后阻斷死細胞DNA分子的聚合酶鏈式反應（PCR）擴增。

本實用新型的其他優點、目標和特征在某種程度上將在隨后的說明書中進行闡述，并且在某種程度上，基于對下文的考察研究對本領域技術人員而言將是顯而易見的，或者可以從本實用新型的實踐中得到教導。本實用新型的目標和其他優點可以通過下面的說明書或者附圖中所特別指出的結構來實現和獲得。

附圖說明

圖1為本實用新型的結構示意圖。

具體實施方式

如圖1所示，本實用新型的箱體1上設有可視窗口3、活動門5、鹵素燈開關6、紫外燈管開關7和總電源開關8，活動門5與箱體1鉸接，箱體1頂部的內壁上設有500W的鹵素燈4，箱體1兩側的內壁上分別安裝有兩個紫外燈管2，兩個平行的紫外燈管2分別左右對稱設置于箱體1的內側面。鹵素燈4提供強光，紫外燈管2用于殺菌，為了提高殺菌效果，在箱體1兩側的內壁上分別安裝兩個紫外燈管2。通過可視窗口3觀察內部的光照交聯效果。

本實用新型可用于永久性修飾細菌死細胞的DNA分子，阻斷DNA分子的聚合酶鏈式反應，從而有效區分樣品中細菌的死活狀態，降低PCR檢測樣品中致病菌的假陽性率。本實用新型可提供約20000lux的強光，進而使PMA與菌懸液混合均勻后在本裝置內進行光照交聯，PMA所帶的光敏性疊氮基團轉化為高活性的氮賓自由基，并與結合位點附近的任意碳氫化合物反應形成穩定的共價氮碳基，致使死細胞DNA分子的永久修飾，最后阻斷死細胞DNA分子的聚合酶鏈式反應（PCR）擴增。?

使用本實用新型快速檢測飼料中沙門氏菌活細胞，采用如下步驟：

1）將飼料樣品用BPW肉湯增菌，吸取500ul菌懸液于1.5mL離心管中，加入4ul?0.5mg/mL的疊氮溴化已啶溶液，將離心管置于冰盒上，在共價交聯裝置內曝光3min；

2）提取細菌DNA；

3）PCR擴增沙門氏菌invA基因：取試劑盒中預混酶及引物混合物，50ul體系吸取40ul，加入提取的細菌DNA10?ul進行PCR擴增，擴增條件為：94℃預變性5min，94℃變性30sec，56℃退火30?sec，72℃延伸45sec，33個循環，最后72℃終延伸10?min；

4）電泳分析：將PCR產物于1%瓊脂糖凝膠上進行電泳，電泳結束后，凝膠成像系統進行成像分析。

最后說明的是，以上實施例僅用以說明本實用新型的技術方案而非限制，本領域普通技術人員對本實用新型的技術方案所做的其他修改或者等同替換，只要不脫離本實用新型技術方案的精神和范圍，均應涵蓋在本實用新型的權利要求范圍中。