[實用新型]一種微衛星不穩定性檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201220164706.8
• 申請日: 2012-04-17
• 公開（公告）號: CN202519251U
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 唐金海;曹海霞;井昶雯;吳建中;王卓
• 申請（專利權）人: 唐金海;曹海霞;井昶雯;吳建中;王卓
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎

技術領域

本實用新型涉及一種檢測試劑盒，尤其是涉及一種微衛星不穩定性檢測試劑盒。

背景技術

微衛星(microsatellites)是遍布于人類基因組中同一脫氧寡核苷酸重復串聯而成的片段，重復順序為1～6bp，重復次數不超過60次，片段長度通常小于350bp，在人群中表現出高度的個體特異性，并且穩定遺傳。人類基因組中包含數萬個微衛星位點，由于它們一般處于可積累中性突變的非編碼DNA區域，在人群中呈現高度多態性。微衛星多態性是微衛星不穩定性(microsatellite?instability，MSI)的表現。微衛星不穩定性表現于同一微衛星位點在不同個體之間以及同一個體的正常組織與某些異常組織之間，微衛星位點的重復單位的數目不同。。微衛星不穩定性的產生原因可能是DNA復制過程中的“鏈滑”現象。DNA復制過程中，當復制復合物復制一個重復單位(repeat?unit)后，子鏈與模板鏈分離，然后與下一個或下幾個重復單位重新結合，使一個或幾個重復單位形成”環凸”。正常情況下該結構可被錯配修復系統(mismatch?repair?system)所校正，但校正系統失常時，子鏈DNA如繼續延伸即可引起突變。

公認研究指標(1997年美國國立癌癥學會工作組提供)顯示，直接對BAT-25、BAT-26、D5S346、D2S123及D17S250共5個位點進行檢測，若其中有2項突變則為MSI-H(High?frequency?MSI)狀態，靈敏度及特異度均會顯著提高，同時MSI腫瘤多位于位于近端結腸，腫瘤體積大，分化差，粘液腺癌多見，常有淋巴細胞浸潤。進一步講，MSI-H常見于大部分的遺傳性非息肉性結直腸癌(HNPCC)及少部分散發性大腸癌，兩者合計約占腸癌的30％[7]。總體來講，與MSI-H相比，MSI-L(Low?frequency?MSI)MSS(microsatellite?stable)腫瘤患者的預后較差，轉移復發常見。

因此，微衛星不穩定性檢測對于結直腸癌預后評價及化療反應性有重要意義。而檢測MSI常用的方法有變性凝膠電泳、變性高效液相色譜分析等，但這些方法敏感性較低。而且方法不十分穩定，難以在臨床廣泛應用。所以探索一種檢測微衛星不穩定性快速可靠的方法已經成為臨床實驗研究的熱點問題。實用新型內容

為了解決上述技術問題，本實用新型提供一種微衛星不穩定性檢測試劑盒，包括盒體1、盒蓋2、引物試劑瓶3、酶混合物試劑瓶4、去離子水管5、PCR管6和設置在盒體1上的擋板7。所述擋板用來卡住引物試劑瓶3、酶混合物試劑瓶4、去離子水管5、PCR管6，使其固定。

所述引物為特異性擴增BAT-25、BAT-26、D5S346、D2S123及D17S250這5個位點的引物。擴增BAT-25位點的上游引物是：5′-TCG?CCT?CCA?AGA?ATG?TAAGT-3′，下游引物是：5′-TCT?GCA?TTT?TAA?CTA?TGG?CTC-3′，引物量為1pmol；擴增BAT-26位點的上游引物是：5′-TGA?CTA?CTT?TTG?ACT?TCA?GCC-3′，下游引物是：5′-AAC?CA?T?TCA?ACA?TTT?TTA?ACC?C-3′，引物量為1pmol；擴增D2S123位點的上游引物是：5′-AAA?CAG?GAT?GCC?TGC?CTT?TA-3′，下游引物是：5′-GGACTT?TCC?ACC?TAT?GGG?AC-3′，引物量為1pmol；擴增D17S250上游引物是：5′-GGAAGA?ATC?AAA?TAG?ACA?AT-3′，下游引物是：5′-GCT?GGC?CAT?ATA?TAT?ATT?TAAACC-3′，引物量為10pmol；擴增D5S346上游引物是：5′-ACT?CAC?TCT?AGT?GATAAA?TCGGG-3′，下游引物是：5′-AGC?AGA?TAA?GAC?AGT?ATT?ACT?AGTT-3′，引物量為1pmol。

所述酶混合物包括濃度為0.4mmol/L的dNTPs，3mmol/L的Mg²⁺，2×緩沖液(2×buffer)，1.25U/25μl的rTaq。

本實用新型與現有產品相比，具有如下積極有益的效果：

本試劑盒結構簡單、設計合理、使用方便、制造容易、檢測過程不易受污染；本試劑盒在檢測微衛星不穩定性時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優點。

附圖說明

圖1為本實用新型的整體結構示意圖。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例對本實用新型進行進一步說明。