[發明專利]一種新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備方法及裝置

有效

• 申請號: 201210593378.8
• 申請日: 2012-12-31
• 公開（公告）號: CN103076448A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 王勇;羅琪
• 申請（專利權）人: 廣州鴻琪光學儀器科技有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 曹志霞

技術領域

本發明實施例涉及生物醫學技術領域，具體涉及一種新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備方法及裝置。

背景技術

子宮頸癌是最常見的惡性腫瘤之一，發病率位于女性腫瘤的第二位。全世界每年大約有20萬婦女死于這種疾病，而對子宮頸癌前病變的早期診斷和治療可以降低其發生率。

目前國際上較先進的一種宮頸癌細胞學檢查技術是新柏氏液基細胞學檢測（TCT，Thinprep?Cytologic?Test），TCT檢查是采用液基薄層細胞檢測系統檢測宮頸細胞并進行細胞學分類診斷的方法，與傳統的宮頸刮片巴氏涂片檢查相比明顯提高了標本的滿意度及宮頸異常細胞檢出率，同時還能發現部分癌前病變，微生物感染如霉菌、滴蟲、病毒、衣原體等。

然而利用新柏氏液基細胞學檢測進行病理診斷不但需要經驗豐富的專家，而且即使這樣，還是會出現誤診和漏診。因此開發簡便快速檢測癌細胞的技術有很大的臨床意義。

發明內容

本發明實施例提供了一種新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備方法及裝置，可以簡單、快速和準確地對子宮頸癌細胞進行鑒別診斷。

本發明實施例提供的新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備方法，包括：

制備膠體金；

利用所述膠體金和抗上皮細胞粘附分子的抗體制備免疫金；

利用所述免疫金對預收集的樣本中的上皮細胞粘附分子進行標記；

對所述樣本進行制片。

可選地，所述膠體金的制備方法包括：

（1）將氯金酸配制成濃度為0.005%-0.015%的水溶液并取100-200ml加熱至沸騰；

（2）攪拌氯金酸水溶液，并向所述氯金酸水溶液加入3-6ml濃度為0.5-1.5%的檸檬酸三鈉水溶液；

（3）將經過步驟（2）處理之后的溶液加熱煮沸15-20分鐘；

（4）冷卻經過步驟（3）處理之后的溶液2-10分鐘至室溫后用雙蒸餾水恢復所述經過步驟（3）處理之后的溶液的體積至原體積，得到膠體金溶液。

可選地，所述利用膠體金和抗上皮細胞粘附分子的抗體制備免疫金的方法包括：

（1）調節所述膠體金溶液的pH值為7.5至8.5；

（2）將所述抗上皮細胞粘附分子的抗體置入透析袋內后放入雙蒸餾水中透析2-4小時或過夜；

（3）對經過步驟（2）處理之后的溶液在4℃下進行離心力為50000-100000g的離心沉淀50-70分鐘并去除所述溶液中的聚合物；

（4）取經過步驟（3）處理之后的溶液的上清液，調整所述上清液的蛋白質至0.5-1mg/ml的濃度并將調整后的上清液作為抗上皮細胞粘附分子的抗體儲存液；

（5）用濃度為0.004-0.006mol/l?pH值為8.5-9.5的硼酸鹽緩沖液將所述抗上皮細胞粘附分子的抗體儲存液作系列稀釋后，取0.05-0.15ml抗上皮細胞粘附分子的抗體系列稀釋液加到0.5-1.5ml所述膠體金溶液中，另設一管不加所述抗上皮細胞粘附分子的抗體系列稀釋液的對照管，4-6分鐘后分別向各管中加入0.05-0.15ml濃度為8-12％的NaCl溶液，混勻各管的溶液后靜置1.5-2.5小時，在能使膠體金穩定的蛋白量上再加9%-11％并將所述蛋白量記為最佳標記蛋白量；

（6）調整所述上清液中蛋白量含量為所述最佳標記蛋白量并加入所述膠體金溶液并充分混合15-30分鐘；

（7）向經過步驟（6）處理之后的溶液中加入濃度為2%-4%的PEG-2000使所述溶液的PEG-2000最終濃度為0.05%-0.1%并攪拌所述溶液10-15分鐘；

（8）取經過步驟（7）處理之后的溶液中的沉淀部分并用含0.5%-1.5%的BSA和0.01%-0.03%的NaN₃的濃度為0.01-0.03mol/l?pH值為7.0-7.4的Tris-HCl的緩沖液稀釋所述沉淀部分，得到免疫金；

（9）回收所述免疫金并用微孔濾膜進行過濾除菌。

可選地，在步驟所述利用所述免疫金對預收集的樣本中的上皮細胞粘附分子進行標記之后和步驟所述對樣本進行制片之前還包括：

對玻片進行預處理；

對樣本細胞的抗體進行孵育；

所述對玻片進行預處理包括：

用濃度為93%-97%的乙醇浸泡處理所述玻片；

用雙蒸餾水清洗所述玻片；

用3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷包被玻片。

可選地，在步驟所述對樣本進行制片之后還包括：