[發明專利]一種新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備方法及裝置

有效

• 申請號: 201210593378.8
• 申請日: 2012-12-31
• 公開（公告）號: CN103076448A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 王勇;羅琪
• 申請（專利權）人: 廣州鴻琪光學儀器科技有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 曹志霞

1.一種新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備方法，其特征在于，包括：

制備膠體金；

利用所述膠體金和抗上皮細胞粘附分子的抗體制備免疫金；

利用所述免疫金對預收集的樣本中的上皮細胞粘附分子進行標記；

對所述樣本進行制片。

2.根據權利要求1所述的新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備方法，其特征在于，所述膠體金的制備方法包括：

（1）將氯金酸配制成濃度為0.005%-0.015%的水溶液并取100-200ml加熱至沸騰；

（2）攪拌氯金酸水溶液，并向所述氯金酸水溶液加入3-6ml濃度為0.5-1.5%的檸檬酸三鈉水溶液；

（3）將經過步驟（2）處理之后的溶液加熱煮沸15-20分鐘；

（4）冷卻經過步驟（3）處理之后的溶液2-10分鐘至室溫后用雙蒸餾水恢復所述經過步驟（3）處理之后的溶液的體積至原體積，得到膠體金溶液。

3.根據權利要求1所述的新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備方法，其特征在于，所述利用膠體金和抗上皮細胞粘附分子的抗體制備免疫金的方法包括：

（1）調節所述膠體金溶液的pH值為7.5至8.5；

（2）將所述抗上皮細胞粘附分子的抗體置入透析袋內后放入雙蒸餾水中透析2-4小時或過夜；

（3）對經過步驟（2）處理之后的溶液在4℃下進行離心力為50000-100000g的離心沉淀50-70分鐘并去除所述溶液中的聚合物；

（4）取經過步驟（3）處理之后的溶液的上清液，調整所述上清液的蛋白質至0.5-1mg/ml的濃度并將調整后的上清液作為抗上皮細胞粘附分子的抗體儲存液；

（5）用濃度為0.004-0.006mol/l?pH值為8.5-9.5的硼酸鹽緩沖液將所述抗上皮細胞粘附分子的抗體儲存液作系列稀釋后，取0.05-0.15ml抗上皮細胞粘附分子的抗體系列稀釋液加到0.5-1.5ml所述膠體金溶液中，另設一支不加所述抗上皮細胞粘附分子的抗體系列稀釋液的對照管，4-6分鐘后分別向各管中加入0.05-0.15ml濃度為8-12％的NaCl溶液，混勻各管的溶液后靜置1.5-2.5小時，在能使膠體金穩定的蛋白量上再加9%-11％并將所述蛋白量記為最佳標記蛋白量；

（6）調整所述上清液中蛋白量含量為所述最佳標記蛋白量并加入所述膠體金溶液并充分混合15-30分鐘；

（7）向經過步驟（6）處理之后的溶液中加入濃度為2%-4%的PEG-2000使所述溶液的PEG-2000最終濃度為0.05%-0.1%并攪拌所述溶液10-15分鐘；

（8）取經過步驟（7）處理之后的溶液中的沉淀部分并用含0.5%-1.5%的BSA和0.01%-0.03%的NaN₃的濃度為0.01-0.03mol/l?pH值為7.0-7.4的Tris-HCl的緩沖液稀釋所述沉淀部分，得到免疫金；

（9）回收所述免疫金并用微孔濾膜進行過濾除菌。

4.根據權利要求1至3中的任一項所述的新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備方法，其特征在于，在步驟所述利用所述免疫金對預收集的樣本中的上皮細胞粘附分子進行標記之后和步驟所述對樣本進行制片之前還包括：

對玻片進行預處理；

對樣本細胞的抗體進行孵育；

所述對玻片進行預處理包括：

用濃度為93%-97%的乙醇浸泡處理所述玻片；

用雙蒸餾水清洗所述玻片；

用3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷包被玻片。

5.根據權利要求4所述的新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備方法，其特征在于，在步驟所述對樣本進行制片之后還包括：

利用顯微鏡對所述制片進行觀察。

6.根據權利要求4所述的新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備方法，其特征在于，在步驟所述對樣本進行制片之后還包括：

對所述制片進行染色；

利用顯微鏡對所述制片進行觀察。

7.一種新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備裝置，其特征在于，包括：

制備單元一，用于制備膠體金；

制備單元二，用于利用所述膠體金和抗上皮細胞粘附分子的抗體制備免疫金；

標記單元，用于利用所述免疫金對預收集的樣本中的上皮細胞粘附分子進行標記；

制片單元，用于對所述樣本進行制片。

8.根據權利要求7所述的新的子宮頸癌細胞的標記技術的制備裝置，其特征在于，所述裝置還包括：

預處理單元，用于對玻片進行預處理；

孵育單元，用于對樣本細胞的抗體進行孵育。