[發明專利]一種防齲DNA疫苗及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201210592602.1
• 申請日: 2012-12-31
• 公開（公告）號: CN103007262A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 李洪嬌;陸一鳴;向婧潔;王少海;魯瑩;汪大林
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: A61K39/09
• 分類號: A61K39/09;A61K47/36;A61P1/02;A61P31/04
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 趙青

1.一種防齲DNA疫苗，其特征在于，該疫苗中的DNA是由變形鏈球菌UA159的wapA蛋白全長基因和真核表達載體pVAX1質粒構成。

2.根據權利要求1所述一種防齲DNA疫苗，其特征在于，其中的DNA序列如SEQ?ID?NO:1所示。

3.根據權利要求2所述的一種防齲DNA疫苗，其特征在于，將該DNA疫苗以殼聚糖作為載體制備成殼聚糖納米復合物。

4.一種如權利要求3所述的防齲DNA疫苗的制備方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

（A）wapA蛋白全長基因克?。?/p>

（B）pVAX1-wapA重組質粒的構建；

（C）載pVAX1-wapA的殼聚糖納米復合物DNA疫苗的構建。

5.根據權利要求4所述的一種防齲DNA疫苗的制備方法，其特征在于，其中的步驟（A）具體為：

（a）變形鏈球菌的培養：將變形鏈球菌UA159菌株的劃線培養于BHI平板培養基上，以期獲得單克隆菌株，培養條件為80%氮氣、10%二氧化碳、10%氫氣、37℃厭氧培養；挑取單克隆接種至TY培養基中，TY培養基為1%蛋白胨、0.8%酵母浸粉、pH5.0，37℃密閉振蕩培養；

（b）提取基因組：以菌基因組提取試劑盒，提取UA159基因組；

（c）wapA蛋白全長基因克?。?/p>

設計并合成如下引物，以變形鏈球菌UA159基因組為模板擴增獲得wapA蛋白全長基因：

pVAX1-wapA-F如SEQ?ID?NO:2所示；

pVAX1-wapA-R如SEQ?ID?NO:3所示。

6.根據權利要求4所述的一種防齲DNA疫苗的制備方法，其特征在于，其中的步驟（B）具體為：

將步驟（A）獲得的wapA基因片段插入到pVAX1質粒中，構建pVAX1-wapA重組質粒，將上述重組質粒轉化感受態細胞DH-5α，提取純化的重組質粒pVAX1-wapA作為DNA疫苗。

7.根據權利要求4所述的一種防齲DNA疫苗的制備方法，其特征在于，其中的步驟（C）具體為：

殼聚糖溶解在NaAc緩沖液，PH=6.0，與含有Na2S04的pVAX1-wapA溶液分別預先加熱到50～55℃，10min，等體積迅速混合，渦旋1min，室溫放置30min，即得DNA疫苗殼聚糖納米復合物。

8.根據權利要求7所述的一種防齲DNA疫苗的制備方法，其特征在于，所述的DNA疫苗殼聚糖納米復合物，組成和配比如下：

質粒pVAX1-wapA????364μl，其中含有質粒100μg，

殼聚糖????????????0.5mg/ml，364μl

Na₂SO₄????????????15mmol/L。

9.一種如權利要求1、2或3所述的防齲DNA疫苗在制備免疫防齲藥物中的應用。

10.根據權利要求8所述的防齲DNA疫苗在制備免疫防齲藥物中的應用，其特征在于，所述的防齲是指防止非蔗糖依賴型齲齒的形成。