[發(fā)明專利]一種檢測熱毒寧注射液中高分子物質(zhì)的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210584857.3
• 申請日: 2012-12-28
• 公開（公告）號: CN103901123A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蕭偉;王振中;畢宇安;王雪;李家春;王永香;徐豐果;章晨峰;徐海娟;付小環(huán)
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;傅婷婷

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屈于藥品檢測領(lǐng)域，涉及一種檢測熱毒寧注射液中高分子物質(zhì)的方法。

背景技術(shù)

中藥注射劑是我國中醫(yī)藥創(chuàng)新的重要成果，其生物利用度高、作用迅速，在治療急重癥方面具有優(yōu)勢，廣泛應(yīng)用于臨床。隨著我國藥品不良反應(yīng)監(jiān)測工作的發(fā)展，中藥注射劑的安全性問題也逐漸顯現(xiàn)。引起不良反應(yīng)的因素很多，有學(xué)者認(rèn)為大分子物質(zhì)的存在亦是其因素之一。熱毒寧注射液(國藥準(zhǔn)字Z20050217，江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))處方由梔子、金銀花、青蒿三味藥材組成，具有清熱、疏風(fēng)、解毒等功效，其除有效成分外，也可能含有導(dǎo)致不良反應(yīng)的大分子物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、聚合物等。為保證臨床用藥的安全，更好地控制藥品質(zhì)量，增加中藥注射劑高分子物質(zhì)檢測十分必要。

王一博等人《HPSEC法檢測中藥注射液中的高分子量物質(zhì)》建立高效分子排阻色譜法(HPSEC)檢測中藥注射液中的高分子量物質(zhì)，該文獻(xiàn)方法的流速偏低，致使保留時(shí)間過長，且易造成峰形展寬等現(xiàn)象；賴宇紅等人《注射用丹參分子排阻色譜及指紋圖譜差減分析》分別應(yīng)用凝膠分子排阻色譜、碳十八反相液相色譜進(jìn)行指紋圖譜分析，通過綜合差減分析揭示非小分子酚酸類成分信息。該文獻(xiàn)采用的流動相為三氟醋酸-乙腈-水(0.05∶10∶90)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明采用此種流動相測定，高分子物質(zhì)的色譜行為為非理想排阻行為。王新彤《清開靈注射液中大分子蛋白的檢測研究》公開了尺寸排阻色譜法可用于清開靈注射劑中大分子蛋白分析，該文獻(xiàn)的線性關(guān)系考察只采用了3個(gè)對照品進(jìn)行考察，數(shù)據(jù)可靠性偏低。

CN102411033A中公開了一種檢測中藥注射液中高分子物質(zhì)的方法，以胸腺肽α和人生長激素釋放抑制因子為對照品，采用TSK?G2000SWXL型凝膠柱對中藥注射液中的高分子物質(zhì)進(jìn)行檢測，結(jié)果在進(jìn)樣體積20μl，檢出限為0.08μg下未能檢出大分子物質(zhì)。但是該方法的流動相為乙腈-0.83％三氟乙酸溶液(40∶60)，根據(jù)《中國藥典2010年版二部》分子排阻色譜法的要求：流動相中有機(jī)相比例不應(yīng)超過30％，且溶液的pH值不宜超出色譜柱的耐受力，該方法有機(jī)相比例超出30％，且酸度過高，超出色譜柱的耐受范圍，不符合《中國藥典》的技術(shù)要求，其檢測結(jié)果的可信度不高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的上述缺陷，提供一種檢測熱毒寧注射液中高分子物質(zhì)的方法。

本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種檢測熱毒寧注射液中高分子物質(zhì)的方法，包含如下步驟：

(1)對照溶液的制備：配制胸腺肽α1標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

(2)供試品溶液的制備：用流動相稀釋熱毒寧注射液，配制成供試品溶液；

(3)檢測：分別吸取供試品溶液和對照溶液注入高效液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定各溶液的色譜將先于胸腺肽α1出峰時(shí)間的峰視為高分子物質(zhì)，按面積歸一化法計(jì)算其含量。

步驟(1)所述的配制胸腺肽α1標(biāo)準(zhǔn)品溶液優(yōu)選取胸腺肽α1標(biāo)準(zhǔn)品，用水溶解并稀釋制成胸腺肽α1濃度為25-50μg/ml的溶液，搖勻，即得。

步驟(2)所述的供試品溶液的制備優(yōu)選：精密量取熱毒寧注射液適量，加流動相稀釋5-10倍，搖勻，即得供試品溶液。

所述的步驟(3)中，高效液相色譜條件優(yōu)選為：色譜柱：凝膠色譜柱；以乙腈-0.1％三氟乙酸體積比為30∶70為流動相；流速為每分鐘0.5-0.7ml；柱溫25-30℃；檢測器：VWD檢測器，檢測波長為214±1nm；理論板數(shù)按胸腺肽α1計(jì)算應(yīng)不低于10000。

所述的步驟(3)中，高效液相色譜條件進(jìn)一步優(yōu)選為：色譜柱：凝膠色譜柱；以乙腈-0.1％三氟乙酸體積比為30∶70為流動相；流速為每分鐘0.7ml；柱溫30℃；檢測器：VWD檢測器，檢測波長為214nm；理論板數(shù)按胸腺肽α1計(jì)算應(yīng)不低于10000。

步驟(3)中高效液相色譜檢測的進(jìn)樣量優(yōu)選10μl。

所述的檢測熱毒寧注射液中高分子物質(zhì)的方法，優(yōu)選包含如下步驟：

(1)對照溶液的制備：

取胸腺肽α1標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱定，用水溶解并稀釋制成胸腺肽α1濃度為25μg/ml的溶液，搖勻，即得，所述的胸腺肽α1標(biāo)準(zhǔn)品分子量為3108；

(2)供試品溶液的制備：

精密量取熱毒寧注射液1ml，加流動相稀釋至10ml，搖勻，即得；

(3)檢測：

分別吸取供試品溶液和對照溶液各10μl注入高效液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，各溶液的色譜圖中將先于胸腺肽α1出峰時(shí)間的峰視為高分子物質(zhì)，按面積歸一化法計(jì)算其含量。

有益效果：