[發明專利]表達特異性HBV shRNA的重組HBV載體及其構建方法和應用有效

申請號：	201210584159.3	申請日：	2012-12-30
公開（公告）號：	CN103014045A	公開（公告）日：	2013-04-03
發明（設計）人：	李俊剛;毛青;王宇明	申請（專利權）人：	中國人民解放軍第三軍醫大學
主分類號：	C12N15/63	分類號：	C12N15/63;C12N15/113;A61K48/00;A61P31/20
代理公司：	北京同恒源知識產權代理有限公司 11275	代理人：	趙榮之
地址：	400038 重***	國省代碼：	重慶;85
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摘要：
搜索關鍵詞：	表達特異性 hbv shrna 重組載體及其構建方法應用
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【權利要求書】：

1.表達特異性HBV?shRNA的重組HBV載體，其特征在于：所述表達特異性HBV?shRNA的重組HBV載體由LJ196載體刪除2111-2643位、187-680位或1060-1500位堿基后，在刪除序列處替換識別所述刪除序列的shRNA轉錄結構單元而得。

2.根據權利要求1所述表達特異性HBV?shRNA的重組HBV載體，其特征在于：所述shRNA轉錄結構單元由啟動子和shRNA編碼序列組成。

3.根據權利要求1所述表達特異性HBV?shRNA的重組HBV載體，其特征在于：所述啟動子為H1啟動子。

4.根據權利要求1-3任一項所述表達特異性HBV?shRNA的重組HBV載體，其特征在于：所述shRNA編碼序列如SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.16、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.22或SEQ?ID?NO.25所示。

5.??權利要求1-4任一項所述重組HBV載體的制備方法，其特征在于：根據LJ196載體序列設計引物，然后以LJ196載體為模板，進行PCR擴增，得刪除LJ196載體2111-2643位、187-680位和1060-1500位堿基的序列，同時克隆H1啟動子并分別與所得序列連接，環化后在H1啟動子3’端連入識別所述刪除序列的shRNA的轉錄結構單元，得重組HBV載體。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于：所述引物為SEQ?ID?NO.2-7所示的核酸序列。

7.根據權利要求5或6所述的制備方法，其特征在于：所述克隆H1啟動子的方法為，以SEQ?ID?NO.8和SEQ?ID?NO.9所示核苷酸序列為引物，以pLVTHM質粒為模板，進行PCR擴增，得H1啟動子。

8.權利要求1-4任一項所述重組HBV載體在制備干擾乙型肝炎病毒基因組DNA復制的藥物中的應用。

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