[發(fā)明專利]一株產(chǎn)納他霉素的新菌株及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210581720.2
• 申請日: 2012-12-27
• 公開（公告）號: CN103045516A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉偉成;劉建華;盧彩鴿;吳慧玲;董丹;張濤濤;劉霆;張殿朋;劉德文;田兆豐;裘季燕;亓芳
• 申請（專利權(quán)）人: 北京市農(nóng)林科學(xué)院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/62;C12R1/465
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，特別涉及一株產(chǎn)納他霉素的新菌株及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

納他霉素是一種四烯大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，為高效、安全的抗真菌天然產(chǎn)物，由于其對哺乳動物細胞的毒性極低，而對真菌的抑制作用極強，抗菌譜極廣，并且能夠阻止絲狀真菌中黃曲霉毒素的形成，加之其溶解度低，可用其對食品表面進行處理以增加食品的保質(zhì)期，卻不影響食品的風(fēng)味和口感，因而是一種十分理想的高效、安全的天然食品防腐劑，多年來在30多個國家被廣泛用于乳制品、肉類、水果、飲料等許多食品工業(yè)中，是國際上被美國FDA正式批準的僅有的兩種生物防腐劑之一。我國1996年食品添加劑委員會對納他霉素進行評價并建議批準使用，1997年3月我國衛(wèi)生部正式批準其作為食品防腐劑，成為我國已批準使用的3種生物防腐劑之一。納他霉素通過鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)，菌株的生產(chǎn)能力是關(guān)系到其發(fā)酵水平和生產(chǎn)成本的關(guān)鍵因素，因此高產(chǎn)菌種的選育是納他霉素研究的熱點之一。前人報道的納他霉素產(chǎn)生菌有恰塔努加鏈霉菌（Streptomyces?chattanovgensis）、納塔爾鏈霉菌（Streptomyces?natalensis）和褐黃孢鏈霉菌（Streptomyces?gilvosporeus）；近年北京市農(nóng)林科學(xué)院植保環(huán)保所研究發(fā)現(xiàn)了納他霉素新的產(chǎn)生菌利迪鏈霉菌（S.lydicus）菌株A01（中國專利，申請?zhí)枮?00710187435.1，授權(quán)公告號為CN100590194C）和A02（中國專利，申請?zhí)枮?00610065620.9，授權(quán)公告號為CN100467588C），其以納他霉素為主要有效成分的活性產(chǎn)物對包括多種植物病原真菌在內(nèi)的供試真菌均有強烈的抑制作用。但因其為野生型菌株，在生產(chǎn)能力和工藝性狀等方面尚不能滿足工業(yè)化生產(chǎn)的要求，因此需要通過菌種選育獲得性狀優(yōu)良的高產(chǎn)新菌株。

目前納他霉素生產(chǎn)菌菌種選育的手段有：誘變育種、原生質(zhì)體育種和基因組重排育種（genome?shuffling）和基因工程育種，這些育種手段各有千秋。誘變育種是實驗室常規(guī)育種手段，其操作簡單、成本低，不需要了解菌株的遺傳背景。但誘變育種正突變率低，篩選工作量大，故構(gòu)建一種快速有效的篩選模式是試驗成功的關(guān)鍵。鑒于目前對納他霉素的遺傳背景和生物合成途徑尚未完全清楚，基因組重排技術(shù)在納他霉素生產(chǎn)菌的遺傳改造中將占據(jù)重要地位。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株產(chǎn)納他霉素的新菌株及其應(yīng)用。

本發(fā)明所提供的產(chǎn)納他霉素的新菌株具體為利迪鏈霉菌（Streptomyces?lydicus）JZB130117。該菌株是以利迪鏈霉菌（Streptomyces?lydicus）A01CGMCC?No.1653與利迪鏈霉菌（Streptomyces?lydicus）A02CGMCC?No.1654為出發(fā)菌株，對其進行誘變、基因組重排（Genome?shuffling）后所得新菌株。該菌株已于2011年12月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學(xué)院微生物研究所），保藏登記號為CGMCC?No.5562。

所述利迪鏈霉菌（Streptomyces?lydicus）JZB130117CGMCC?No.5562在制備納他霉素中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護范圍。

本發(fā)明的再一個目的是提供一種制備納他霉素的方法。

本發(fā)明所提供的制備納他霉素的方法，具體可包括如下步驟：發(fā)酵培養(yǎng)所述利迪鏈霉菌（Streptomyces?lydicus）JZB130117CGMCC?No.5562，收集發(fā)酵產(chǎn)物，獲得納他霉素。

在上述方法中，所述發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基（發(fā)酵培養(yǎng)基）的溶劑為水，溶質(zhì)及其終濃度如下：玉米淀粉(35.0-40.0)g/L，棉籽精粉(20.0-25.0)g/L，葡萄糖(10.0-15)g/L，豆粕粉(25.0-28.0)g/L，蛋白胨(5.0-8.0)g/L，MgSO₄·7H₂O(1.0-1.2)g/L，KH₂PO₄(0.2-0.3)g/L，NaCl(4.0-6.0)g/L，(NH₄)₂SO₄(5.0-6.0)g/L和CaCO₃(5.0-8.0)g/L，pH7.0~7.4。