[發明專利]一種生產7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法及其專用培養基

有效

• 申請號: 201210566819.5
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103013903A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 楊凌;侯琨;欒宏偉
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C07H17/04;C07H1/08
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 張晨

技術領域

本發明屬于植物細胞工程領域，具體涉及一種生產7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法及其專用培養基。

背景技術

紫杉醇（1）作為臨床一線抗癌用藥，目前被廣泛用于卵巢癌、乳腺癌、肺癌等多種實體癌的治療。目前規?；a紫杉醇的途徑主要是從紅豆杉屬植物中直接提取或提取其半合成前體——10-去乙酰巴卡亭III（2），再通

過合成手段合成紫杉醇。最近，以7-木糖-10-去乙酰紫杉醇（3）作為原料，合成紫杉醇的工藝被陸續開發出來（US5412116，US6028206，US5856532，US6437154，ZL200610046296.6和ZL200610047743.X）。7-木糖-10-去乙酰紫杉醇與紫杉醇同屬三環二萜類化合物，在南方、云南和中華紅豆杉枝葉中廣泛存在，該化合物與紫杉醇的差別僅在于C-7位多一個木糖基，C-10位缺少一個乙?；虼巳绻ㄟ^有效方法去除C-7木糖基，并在C-10引入乙?；涂梢詫⑵滢D化為紫杉醇，從而達到對我國紅豆杉資源的有效利用。因此該工藝將是未來紫杉醇產業中不可缺少的工藝之一。但由于可再生資源中其他有用紫杉烷含量較低，因此整體利用價值不高，導致7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的來源成為制約該工藝的主要因素。

利用植物細胞培養方法生產紫杉醇因其生產周期短、可控性強、不破壞資源等優點日益受到重視。但傳統工藝更多關注的是紫杉醇含量的高低，由于紫杉醇毒性高，水溶性差的特點，導致產率達到一個極限值后很難再有所突破。7-木糖-10-去乙酰紫杉醇是紫杉醇代謝路徑上的一個中間化合物，其水溶性是紫杉醇10倍以上，而毒性是紫杉醇的1/10，在理論上，應該是一個更容易在細胞中累積的化合物。因此利用植物細胞培養的方法獲得7-木糖-10-去乙酰紫杉醇應該是一個有效的方法，但遺憾的是之前并無這方面的報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種生產7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法及其專用培養基。

本發明提供了一種基本培養基，該培養基的配方為：NH₄NO₃?1100-1300mg，KNO₃?1800-2000mg，KH₂PO₄?320-360mg，CaCl₂·2H₂O?420-460mg，MgSO₄·7H₂O?350-380mg，FeSO₄·7H₂O?26-29mg，Na₂-EDTA?36-38mg，MnSO₄·4H₂O?2.0-2.5mg，H₃BO₃?0.5-0.7mg，KI?0.7-0.9mg，Na₂MoO₄·2H₂O?0.02-0.03mg，CuSO₄·5H₂O?0.002-0.003mg，CoCl₂·6H₂O?0.002-0.003mg,Zn·Na-EDTA?12-17mg，鹽酸硫胺素0.4-0.6mg，煙酸0.4-0.6mg，鹽酸吡哆醇0.4-0.6mg，甘氨酸1-3mg，用水定容至1L，pH5.6-5.8。

本發明還提供了利用所述培養基生產7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法，該方法步驟如下：

1）無菌條件下，將紅豆杉的外植體在體積百分濃度70%的乙醇中消毒30s，再將其置于質量百分濃度為10%的次氯酸鈉中殺菌20min，用無菌水沖洗3次，接種前將外植體切成長度為5mm的小段，將其接種于愈傷組織誘導培養基中在24℃，黑暗條件下誘導愈傷組織；

2）將愈傷組織接種于繼代培養基中在24℃，黑暗條件下進行繼代培養。

本發明提供的生產7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法，所述愈傷組織誘導培養基為在權利要求1所述的基本培養基的基礎上添加2,4-D?1-7mg，蔗糖20-50g，瓊脂5-8g/L。

本發明提供的生產7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法，所述繼代培養基為在權利要求1所述的基本培養基的基礎上添加2,4-D?1-5mg，蔗糖20-50g，瓊脂5-8g/L。

本發明提供的生產7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的方法，所述紅豆杉為南方紅豆杉、云南紅豆杉或中華紅豆杉。