[發(fā)明專利]一種雙功能靶向量子點脂質(zhì)體制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210560553.3
• 申請日: 2012-12-21
• 公開（公告）號: CN102973510A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉璐;閆志強;何丹農(nóng)
• 申請（專利權(quán)）人: 上海納米技術(shù)及應(yīng)用國家工程研究中心有限公司
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K31/704;A61K49/18;A61K47/02;A61K47/42;A61P35/00
• 代理公司: 上海東方易知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 31121
• 代理人: 唐莉莎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種納米材料技術(shù)領(lǐng)域的脂質(zhì)體制備方法，特別是涉及一種雙功能靶向量子點脂質(zhì)體制備方法。

背景技術(shù)

腫瘤是威脅人類健康和生命的主要疾病，近年來其發(fā)病率呈明顯的上升趨勢。在治療上，外科手術(shù)不能徹底清除腫瘤細(xì)胞和腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)，從而導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)；化療藥物靜注給藥后，對腫瘤組織無選擇性，具有嚴(yán)重的全身性毒副作用；放療往往會引起患者嚴(yán)重的局部皮膚反應(yīng)、血象變化、局部粘膜反應(yīng)等。由于腫瘤組織對具有一定粒徑的納米顆粒(10-500?nm)具有EPR?(高通透性和滯留)?效應(yīng)，即處在血循環(huán)中的納米顆粒可被動靶向至腫瘤組織，發(fā)揮所包載藥物的抗腫瘤作用。目前，已有多種利用此效應(yīng)用于腫瘤靶向治療的納米遞藥系統(tǒng)上市，如阿霉素脂質(zhì)體、順鉑脂質(zhì)體和紫杉醇白蛋白納米粒，來實現(xiàn)對腫瘤組織的主動靶向遞藥。與被動靶向相比，主動靶向納米遞藥系統(tǒng)顯示出對腫瘤組織更好的靶向性和生長抑制作用，但是，由于主動靶向制劑復(fù)雜的處方和制備工藝、質(zhì)量控制較難、未知的生物安全性等問題，至今仍只有少量產(chǎn)品進入I期或II期臨床。

Neuropilin-1?(NRP-1)是細(xì)胞表面的一種I?型跨膜糖蛋白，通常表達在一些腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，是血管內(nèi)皮生長因子165?(VEGF165)的受體，在腫瘤轉(zhuǎn)移、血管新生、調(diào)節(jié)血管通透性等方面發(fā)揮重要功能。專利CN?102516361?A中對NRP-1配體多肽聚乙二醇磷脂復(fù)合物、其介導(dǎo)的主動靶向脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)做了研究，證明其對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有良好的靶向性。

量子點是一種有著優(yōu)良的熒光性能的半導(dǎo)體納米晶，它具有窄的并且波長隨粒子大小可調(diào)的熒光發(fā)射峰、連續(xù)的吸收光譜以及穩(wěn)定且高亮度的熒光發(fā)射等優(yōu)點，在生物標(biāo)記中發(fā)揮著越來越重要的作用。發(fā)明專利CN?101327189?A對具有標(biāo)記和治療雙功能的納米乙醇脂質(zhì)體材料的制備進行了研究，為癲痕和皮膚病的治療提供了材料。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供一種雙功能靶向量子點脂質(zhì)體的制備方法。該方法制備的靶向量子點脂質(zhì)體，具有診斷和治療的雙重功能。

一種雙功能靶向量子點脂質(zhì)體制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

a.?單一量子點脂質(zhì)體的制備：分別稱取磷脂、膽固醇、甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物和NRP-1配體多肽聚乙二醇磷脂復(fù)合物溶于氯仿中制備得到均勻脂質(zhì)膜，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干氯仿；再溶于量子點的硫酸銨溶液，其中硫酸銨的濃度為0.32?M，在20～70℃水浴中震蕩得到脂質(zhì)體混懸液；再于20～70℃水浴中依次擠壓過400、200和100?nm核孔膜，以生理鹽水洗脫通過Sephadex?G-50凝膠柱除去未包封的量子點，即得含有量子點的主動靶向脂質(zhì)體；

b.?將含有量子點的主動靶向脂質(zhì)體，加入阿霉素生理鹽水溶液，60℃水浴?20min；以生理鹽水洗脫通過Sephadex?G-50凝膠柱，除去游離藥物，得雙功能靶向量子點脂質(zhì)體。

所述磷脂的濃度為2.5-3.5mg/ml，所述膽固醇的濃度為0.5-0.9mg/ml，所述甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物的濃度為0.5-1.2mg/ml，所述NRP-1配體多肽聚乙二醇磷脂復(fù)合物的濃度為0.05-0.5mg/ml。

所述的磷脂為蛋磷脂、氫化大豆磷脂酰膽堿、氫化蛋磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆寇酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、1-肉豆寇酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿、1-硬脂酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰-2-油酰磷脂酰膽堿、1-硬脂酰-2-亞油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、氫化二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆寇酰磷脂酸、二肉豆寇酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二肉豆蓮酰磷脂酰乙二醇胺、二棕櫚酰磷脂耽乙二醇胺、腦磷脂酰絲氨酸、二肉豆寇酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、蛋磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆寇酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、腦鞘磷脂、二棕櫚酰鞘磷脂、二硬脂酰鞘磷脂中的一種。

所述甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物中聚乙二醇重均分子量為2000。

所述NRP-1配體多肽聚乙二醇磷脂復(fù)合物中聚乙二醇重均分子量為3500。

所述甲氧基聚乙二醇-磷脂復(fù)合物中的磷脂為二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氫化大豆磷脂酰乙醇胺、氫化蛋黃磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺、蛋磷脂酰乙醇胺中的一種。