[發(fā)明專利]一種耐貯獼猴桃新品種的選育方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210558359.1
• 申請日: 2012-12-21
• 公開（公告）號: CN102994545A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發(fā)明（設計）人: 田宏現(xiàn);苑平;劉藝
• 申請（專利權）人: 吉首大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種耐貯獼猴桃新品種的選育方法，其特征在于包含以下幾個步驟：

（1）ACO基因的獲得，從獼猴桃葉片中提取RNA，再將RNA反轉錄成cDNA，最后通過設計引物獲得ACO基因；

（2）將ACO基因反向連接入雙右邊界雙元載體，將載體轉化入農(nóng)桿菌中，通過葉盤轉化法導入愈傷組織中，再通過篩選培養(yǎng)基獲得抗性愈傷組織，經(jīng)過分化培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得含有篩選標記再生苗；

（3）上游引物為Term?F:?5′-GGT,GCT,TTC,CCA,GTC,CAA,ATC,GTT-3′，下游引物為Term?R:?5′-CCA,GGT,TTA,GTC,GTC,TCG,TGT,CTG,GT-3′，進行PCR擴增，80－105℃預變性3－10min后運行下循環(huán)，94℃?35?s，59℃?35?s，72℃?40?s，共35個循環(huán)，最后72℃?10?min，25℃?30?s，取PCR產(chǎn)物5－30?μL進行0.6%－1.5％瓊脂糖凝膠電泳分離獲得陽性植株；

（4）通過遺傳分離獲得無篩選標記的含有目的基因的植株，將同時含有hpt基因和aco基因的共轉化植株轉移至溫室栽培，隨機挑選其中10－50個T0代植株進行自交產(chǎn)生T1代后對T1代植株的基因組DNA進行PCR檢測，從而獲得無篩選標記的含有目的基因的植株。