[發(fā)明專利]一種靈芝多糖的提取方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210557813.1
• 申請日: 2012-12-20
• 公開（公告）號: CN103073651A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 游麗君;馮夢瑩;趙謀明;崔春;劉鈞發(fā);任嬌艷
• 申請（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué)
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;C12N5/09
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及靈芝深加工技術(shù)，具體是靈芝多糖的提取方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

靈芝(Ganoderma?Lucidum)，為擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬真菌，是擁有數(shù)千年藥用歷史的珍貴藥材。《神農(nóng)本草經(jīng)》記載，靈芝具有扶正固本、滋補(bǔ)強(qiáng)壯、延年益壽等功效。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，靈芝具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫功能、降血糖、保肝、抗衰老、抗炎、抗凝血等多種藥理作用。靈芝多糖作為靈芝的主要有效成分之一，近年來逐漸受到研究人員的重視。如北京世紀(jì)博康醫(yī)藥科技有限公司（中國專利申請?zhí)?00810119495.4）公開一種應(yīng)用于防治肝損傷、調(diào)節(jié)免疫力的靈芝多糖組合物；中國科學(xué)院上海藥物研究所（中國專利申請?zhí)?3116403.X）公開一種靈芝多糖的制備方法及其在免疫促進(jìn)方面的應(yīng)用；北京大學(xué)（中國專利申請?zhí)?00410006198.0）公開一種用于預(yù)防、改善或治療失眠癥的靈芝多糖組合物等。

隨著全球癌癥發(fā)病率和死亡率的急劇上升，科研工作者進(jìn)行了大量相關(guān)的研究工作以對抗癌癥。其中研發(fā)生物活性高且毒性低的新型抗癌藥物是一個(gè)非常活躍的領(lǐng)域。傳統(tǒng)的癌癥治療常常對正常細(xì)胞也有毒性作用，并且可引發(fā)一系列的副反應(yīng)，而從植物、微生物、海產(chǎn)品中提取的天然多糖不但有較高的生物活性，而且非常安全。靈芝多糖具有良好的抗腫瘤和增強(qiáng)免疫活性活性。如福州綠谷生物藥業(yè)技術(shù)研究所（中國專利申請?zhí)?00510095532.9）公開一種靈芝多糖的制備方法及其抑制S180荷瘤小鼠腫瘤生長、促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的作用，（中國專利申請?zhí)?3116403.X）公開靈芝多糖蛋白的制備方法及其對裸鼠異種人肺癌PG細(xì)胞增殖的抑制作用。但暫未有關(guān)于靈芝多糖對人肺癌細(xì)胞A549抑制作用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是填補(bǔ)目前關(guān)于應(yīng)用靈芝多糖抑制人肺癌細(xì)胞A549方面的空白，提供一種靈芝多糖的提取方法及應(yīng)用。將本發(fā)明的靈芝多糖加入到A549細(xì)胞培養(yǎng)液中，可顯著抑制A549細(xì)胞增殖，具有正面作用。

本發(fā)明同時(shí)提供了所述靈芝多糖在抑制人肺癌細(xì)胞A549增殖中的具體應(yīng)用。

本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

一種靈芝多糖的提取方法，其包括如下步驟：

（1）靈芝粉碎后加乙醇，微沸提取3-5小時(shí)，過濾得靈芝渣，30-60℃下烘干得靈芝粉備用；

（2）靈芝粉加入有機(jī)酸溶液，加入酶，超聲條件下提取20-60分鐘，過濾得提取液；

（3）將步驟（2）所得的提取液用截留分子量10000道爾頓的膜進(jìn)行超濾，收集透過液部分；

（4）將超濾透過液進(jìn)行真空濃縮，至原來體積的1/5-1/3，得濃縮液；

（5）在濃縮液中加入乙醇，混合均勻后，在0-4℃下靜置8-14小時(shí)，過濾，除去上層清液部分，得多糖沉淀；

（6）收集沉淀物，冷凍干燥，獲得靈芝多糖。?

進(jìn)一步優(yōu)化的，步驟（1）所述乙醇為95%乙醇。

進(jìn)一步優(yōu)化的，步驟（2）所述有機(jī)酸為檸檬酸或蘋果酸的一種，且溶液的pH值為1.5-3，其用量為靈芝粉重量的20-40倍。

進(jìn)一步優(yōu)化的，步驟（2）所述酶為真菌酸性蛋白酶，酶的加入量為靈芝粉質(zhì)量的0.5-2%。

進(jìn)一步優(yōu)化的，步驟（2）所述超聲功率為320W-640W，超聲溫度為30-70℃。

進(jìn)一步優(yōu)化的，步驟（5）所述乙醇添加量為

混合均勻后乙醇最終濃度為50-70%（v/v）。

進(jìn)一步優(yōu)化的，步驟（6）所述冷凍干燥得淺棕色靈芝多糖，溶于水。

上述制備方法制得的靈芝多糖的應(yīng)用是，在DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)人肺癌細(xì)胞A549，加入0.2-2mg/ml靈芝多糖，可顯著抑制A549細(xì)胞增殖（通過MTT實(shí)驗(yàn)評價(jià)靈芝多糖對A549細(xì)胞增值作用）。

本發(fā)明上述制備方法制得的靈芝多糖可以進(jìn)一步用于制備抗癌藥物。所述靈芝多糖能抑制人肺癌細(xì)胞A549增殖。靈芝多糖濃度為2mg/ml時(shí)，對人肺癌細(xì)胞A549的抑制率可達(dá)53.04-68.37%。

本發(fā)明采用了以上技術(shù)方案，具有如下的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

1、本發(fā)明提供了一種靈芝多糖的提取方法及應(yīng)用，將本發(fā)明的靈芝多糖加入到A549細(xì)胞培養(yǎng)液中，可顯著抑制A549細(xì)胞增殖，具有正面作用。

2、本發(fā)明發(fā)現(xiàn)提取過程中添加真菌酸性蛋白酶，所得靈芝多糖提取率與傳統(tǒng)水提法接近，但可大幅縮短提取時(shí)間、降低能耗，同時(shí)抗氧化效果也較傳統(tǒng)水提法好。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例和附表對本發(fā)明的具體實(shí)施作進(jìn)一步說明。