[發明專利]一種用量子點熒光免疫層析試紙條檢測的方法

有效

• 申請號: 201210546243.6
• 申請日: 2012-12-15
• 公開（公告）號: CN103048460A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發明（設計）人: 彭俊;朱小波;龐代文;張志凌;余慧
• 申請（專利權）人: 武漢珈源生物醫學工程有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 武漢華旭知識產權事務所 42214
• 代理人: 劉榮

技術領域

本發明涉及一種用量子點熒光免疫層析試紙條檢測的方法，屬于免疫檢測領域。

背景技術

免疫層析試紙條檢測也稱為免疫側向層析，是一種快速、簡便、靈敏、直觀、價格低廉，并可進行現場檢測的方法。具有放射性免疫、酶聯免疫吸附法、氣相色譜法、液相色譜法、毛細管電泳等儀器檢測方法所不具備的優點，在檢測技術中處于重要地位，是對傳統和大型儀器檢測方法的有力補充。隨著社會的發展，人類對生活質量有了更高的要求，免疫層析檢測技術在面對人類疾病、環境污染物、食品安全、動物醫學等重大問題時具有重要的作用。

當前免疫層析產品主要是基于膠體金技術而開發的，在醫學檢驗、毒品檢測、食品安全檢測等領域得到了廣泛的應用。但該技術由于存在顆粒粒徑均一性差、免疫標記物不穩定、顏色單一只能單指標檢測、無法實現準確定量檢測、靈敏度不高等不足，無法滿足人們的需求。因此發明高靈敏度、多指標同時檢測、簡便、直觀、價格低廉的免疫層析檢測方法十分必要。

量子點是一種在光源激發下發射出明亮熒光的半導體納米晶粒。具有以下特點：

1、粒徑不同，發光顏色不同，并且可以用單一光源激發多種不同顏色的量子點；

2、量子點的發射譜狹窄對稱，同時激發的多種量子點不易出現重疊，使多重分子同時檢測容易實現；

3、量子點的量子產率高、熒光強，可以接受長時間反復激發，光化學穩定性好，不易猝滅。

由于量子點具有以上優良特性，使其可能成為分子檢測和醫學診斷的有力工具，經過近20多年的發展，逐步從細胞、組織標記成像、細胞示蹤、活體成像等應用研究開始向臨床檢測、疾病控制、食品安全檢測等領域方向發展。但目前各種現有的涉及量子點的免疫層析試紙條檢測方法，或者由于選用的為核型量子點、水相合成的量子點或者量子點包裹微球等，或者由于采取固化方法將其固定在結合區，而影響了檢測靈敏度的提高并造成精密度差。

發明內容

為克服現有技術中的不足，本發明提供了一種用量子點熒光免疫層析試紙條檢測的方法，該方法是一種高靈敏度、多指標同時檢測、簡便、直觀、價格低廉、應用廣泛的量子點熒光免疫層析試紙條快速檢測方法。

實現上述目的的技術方案為一種用量子點熒光免疫層析試紙條檢測的方法，具體采用如下步驟：

（1）.?量子點標記蛋白液的制備：取濃度為1μM-10μM的0.2-2nmol羧基水溶性CdSe/ZnS量子點平衡至室溫，并用超聲波處理；將量子點、EDC、蛋白均用20mM~200mM?、pH6.0~7.4的磷酸鹽溶液或硼酸鹽溶液溶解；按照1μmol~5μmol?EDC/2nmol量子點的比例加入EDC，EDC即碳二亞胺鹽酸鹽，渦旋振蕩混勻，再按1nmol~100nmol?蛋白/1nmol量子點的比例加入濃度為1~10mg/mL的蛋白，渦旋混勻，室溫攪拌反應1-4小時；反應結束后用截留分子量為10kDa-100kDa的離心超濾管超濾濃縮至20-100μL，然后采取凝膠尺寸排阻色譜法進行純化，收集有熒光的部分，再用離心超濾管濃縮至量子點濃度為0.2-2μmol/L，保存于10mM-100mM、?pH為7.4~9.0的、含有質量百分比濃度為0.05%的NaN₃的硼酸鹽緩沖液中，2~8℃冰箱保存備用；?

（2）.?量子點標記蛋白檢測液的制備：將上述量子點標記蛋白液取出放置至室溫，用PBS-TBN稀釋100-1000倍成量子點標記蛋白檢測液，PBS-TBN為含20mM-150mM氯化鈉NaCl、0.02%-0.1%?吐溫Tween-20、2mg/mL-10m/mL?牛血清白蛋白BSA、0.05%?疊氮化鈉NaN₃的10mM-100mM磷酸鹽緩沖液PB，然后置于2~8℃冰箱保存備用；