[發明專利]基于量子點的免疫熒光微流控芯片及其制法和用途

無效

• 申請號: 201210545258.0
• 申請日: 2012-12-14
• 公開（公告）號: CN103018437A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 朱俊杰;曹俊濤
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544;B01L3/00
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 黃嘉棟

技術領域

本發明涉及量子點免疫熒光微流控芯片單細胞水平細胞膜表面糖基分析方法。

背景技術

單細胞行為信息的獲取是非常重要的。[參見：(a)?Sethuraman,?N.;?Stadheim,?T.?A?Curr.?Opin.?Biotechnol.?2006,?17,?341?346.?(b)?Rao,?C.?V.;?Wolf,?D.?M.;?Arkin,?A.?P.?Nature?2002,?420,?231?237.]。流式細胞術作為最常用的技術之一可以實現單細胞數據的高通量獲取，然而其對少量細胞樣品的分析能力受到一定的限制。光鉗技術，介電電泳技術雖可以有效捕獲并操控單細胞并用于分析，但這些技術通量均不高從而并不適用于細胞生物學實驗室。微流控芯片技術以其便捷的細胞操控，精確的試劑傳輸，和低的樣品消耗正受到廣泛關注[參見：(c)?Carlo,?D.?D.;?Aghdam,?N.;?Lee,?L.?P.?Anal.?Chem.?2006,?78,4925?4930.?(d)?Wlodkowic,?D.;?Faley,?S.;?Zagnoni,?M.;?Wikswo,?J.?P.;?Cooper,?J.?M.?Anal.?Chem.?2009,?81,?5517?5523.?(e)?Figueroa,?X.?A.;?Cooksey,?G.?A.;?Votaw,?S.?V.;?Horowitz,?L.?F.;?Folch,?A.?Lab?Chip?2010,?10,?1120?1127.?(f)?Hosokawa,?M.;?Hayashi,?T.;?Mori,?T.;?Yoshino,?T.;?Nakasono,?S.;?Matsunaga,?T.?Anal.?Chem.?2011,?83,?3648?3654.]。

免疫熒光技術在科學研究和臨床診斷當中都被廣泛使用。其被用于評估組織、培養細胞群體、單細胞特異性蛋白[參見：(g)?Behrens,?M.;?Born,?S.;?Redel,?U.;?Voigt,?N.;?Schuh,?V.;?Raguse,?J.-D.;?Meyerhof,?W.?PLoS?One?2012,?7,?e40304.?(h)?Fitzpatrick,?E.;?Mcbride,?S.;?Yavelow,?J.;?Najmi,?S.;?Zanzucchi,?P.;?Wieder,?R.?Clin.?Chem.?2006,?52,?1080?1088.]、生物小分子[參見：(i)?Falsey,?J.?R.;?Renil,?M.;?Park,?S.;?Li,?S.;?Lam,?K.?S.?Bioconjugate?Chem.?2001,?12,?346?353.]、糖殘基[參見：(j)?Venkatesan,?C.;?Chrzaszcz,?M.;?Choi,?N.;?Wainwright,?M.?S.?J.?Neuroinflammation?2010,?7,?32.]等。其中，細胞表面糖殘基的表達與細胞的貼壁、分化以及免疫識別都密切相關。其表達改變常常與疾病相關，特別是癌癥[參見：(k)Radhakrishnan,?P.;?Lin,?M.?F.;?Cheng,?P.?W.?Glycoconjugate?J.?2009,?26,?75?81.]。目前常用得糖基分析方法包括質譜法[參見：(l)?Yamada,?K.;?Hyodo,?S.;?Kinoshita,?M.;?Hayakawa,?T.;?Kakehi,?K.?Anal.?Chem.?2010,?82,?7436?7443.]，色譜法[參見：(m)?Klapoetke,?S.;?Zhang,?J.;(n)?Becht,?S.;?Gu,?X.;?Ding,?X.?J.?Pharm.?Biomed.?Anal.?2010,?53,?315?324.]，核磁共振[參見：(o)?Gustafsson,?A.;?Sjoblom,?M.;?Strindelius,?L.;?Johansson,?T.;?Fleckenstein,?T.;?Chatzissavidou,?N.;?Lindberg,?L.;??ngstrom,?J.;?Rova,?U.;?Holgersson,?J.?Glycobiology?2011,?21,?1071?1086.]等。然而這些方法常常需要昂貴的儀器設備，專業化的操作人員，尤其是需要對細胞樣品進行破壞性處理從而限制其應用。而基于有機染料或熒光蛋白的免疫熒光分析方法又常常面臨一個光漂白的問題。量子點作為一種高量子產率和高穩定性的納米材料成為一類新型熒光探針，受到越來越多的關注。但至今尚未有基于量子點的免疫熒光芯片用于單細胞水平膜表面糖基表達分析方法的報道。