[發明專利]脈血康膠囊的檢測方法

無效

• 申請號: 201210544117.7
• 申請日: 2012-12-14
• 公開（公告）號: CN103076405A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 張觀福
• 申請（專利權）人: 貴州信邦制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N21/31;G01N33/15;G01N30/90;G01N31/16
• 代理公司: 北京聯創佳為專利事務所(普通合伙) 11362
• 代理人: 郭防

1.一種脈血康膠囊的檢測方法，其特征在于：所述脈血康膠囊由鮮水蛭粉碎后填充膠囊而得；所述檢測方法包括對氨基酸和多糖的含量測定，其中，氨基酸的含量測定方法為：采用高效液相色譜法測定：

色譜條件：ODS色譜柱4.6mm×250mm，5μm；流動相A相：0.02mol·L^-1醋酸鉀溶液，加四氫呋喃2.85μl；所述0.02mol·L^-1的醋酸鉀溶液是由三乙醇胺與1.5％冰醋酸溶液調至pH7.2；B相：pH7.2的0.1mol·L^-1醋酸鉀溶液∶甲醇∶乙腈＝200∶200∶200；梯度洗脫：0～15min，100％A相，15～16min，40％A相-60％B相，16～30min100％B相；波長：初始338nm，16.5min時262nm；流速：1ml·min^-1；柱溫：20～25℃；

供試品溶液的制備：取4粒脈血康膠囊去殼，精密稱取內容物粉末1.0g，加0.9％生理鹽水50ml浸泡24h，勻漿，以3000r·min離心10min，收集上清液；所余沉淀再以30ml乙醇60℃回流2次，每次30min，合并提取液，濾過，揮去乙醇至無醇味，放至室溫后加入上述上清液溶解即得提取液；精密量取脈血康膠囊提取液50μl置于有蓋小瓶，加含1％苯酚的6mol·L^-1鹽酸200μl，沖氮氣1min，壓蓋后置于恒溫反應器中，110℃反應20h，取出后加入40％氫氧化鉀溶液120μl，渦旋8～10min，濾過，取續濾液作為供試品溶液；

對照品溶液的制備：精密量取氨基酸標準品2ml，無需做任何處理，直接進樣；

測定法：分別取待測供試品溶液和對照品溶液各5μl，置于自動進樣瓶中，進樣測定，即得。

2.如權利要求1所述脈血康膠囊的檢測方法，其特征在于：所述多糖的含量測定方法為：采用分光光度法測定：

供試品溶液的制備：取膠囊內容物粉末2.0g，精密稱定，置于索式提取器中，加入60～90℃的石油醚120ml回流提取8h，棄取石油醚，殘渣揮干石油醚，再置于圓底燒瓶中，加蒸餾水50ml回流提取3次，每次1h，合并提取液，濾過，濾液濃縮至50ml，加氯仿50ml萃取3次，取上清液置于100ml量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置冰箱內備用；

對照品溶液的制備：精密稱定葡萄糖對照品0.0035g，加蒸餾水溶解，定容于25ml量瓶中，即得濃度為0.140mg·ml^-1的葡萄糖對照品溶液；

測定法：分別量取對照品溶液和樣品供試液0.5ml于試管中，加蒸餾水1ml，精密加入苯酚1.0ml，迅速加入濃硫酸5.0ml搖勻，冷卻至室溫；同法制備空白溶液，置于沸水加入15min，冷卻；在487nm處測定吸收度值，即得。

3.如權利要求1或2所述脈血康膠囊的檢測方法，其特征在于：

【性狀】

本品為腸溶膠囊劑，內容物為灰黃色至灰褐色顆粒或粉末；氣微腥，味微咸；

【鑒別】

取本品內容物2g，加生理鹽水10ml，充分攪勻，浸漬30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；另取水蛭對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各1μl，分別點于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸∶乙醇∶水=4∶1∶1∶2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5％茚三酮溶液，在110℃烘約5分鐘，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的紫色斑點；

【檢查】

水分

稱取本品內容物2.0～2.2g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶40*25mm中，厚度不超過5mm，照中國藥典水分測定法測定，不得過7.0％；

裝量差異

照中國藥典膠囊劑裝量差異項下測定，取供試品10粒，分別精密稱定重量，傾出內容物，硬膠囊囊殼用小刷或其它適宜的用具拭凈；分別精密稱定囊殼重量；求出每粒內容物的裝量；每粒裝量與標示量相比較，超出裝量差異限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度一倍；規定本膠囊劑裝量差異限度為標示裝量的±7.5％；

崩解時限

照中國藥典崩解時限檢查法測定，在鹽酸溶液9→1000中檢查2小時，每粒的囊殼均不得有裂縫或崩解現象；將吊籃取出，用少量水洗滌后，每管加入擋板，依法在人工腸液中檢查，40分鐘內應全部崩解；如有一粒不能完全崩解，應另取6粒復試，均應符合規定；

【含量測定】

抗凝血酶活性測定

取本品裝量差異項下的內容物約1g，精密稱定，精密加入生理鹽水5ml，充分攪拌，浸提30分鐘，并時時振搖，離心，精密量取上清液100μl，置試管中，加入含0.5％纖維蛋白原的三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液200μl，所述0.5％纖維蛋白原的三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液是取0.2mol/L三羥甲基氨基甲烷溶液25ml與0.1mol/L鹽酸溶液40ml，加水至100ml，即得，pH值7.4；搖勻，置37℃緩緩滴加每1ml中含40U的凝血酶溶液，每分鐘5μl，邊滴加邊輕輕搖勻至凝固，記錄消耗凝血酶溶液的體積數，按下式計算：

U＝C₁V₁W/C₂V₂

式中U：每粒含抗凝血酶活性單位；

C₁：凝血酶溶液的濃度(μ/ml)；

C₂：供試品溶液的濃度(g/ml)；

V₁：消耗凝血酶溶液的體積(μl)；

V₂：供試品溶液的加入量(μl)；

W：平均裝量；

中和一個國際單位的凝血酶的量，為一個抗凝血酶活性單位；

本品每粒含抗凝血酶活性應為11.9～16.1U；

氨基酸含量測定

色譜條件：ODS色譜柱4.6mm×250mm，5μm；流動相A相：0.02mol·L^-1醋酸鉀溶液，加四氫呋喃2.85μl；所述0.02mol·L^-1的醋酸鉀溶液是由三乙醇胺與1.5％冰醋酸溶液調至pH7.2；B相：pH7.2的0.1mol·L^-1醋酸鉀溶液∶甲醇∶乙腈＝200∶200∶200；梯度洗脫：0～15min，100％A相，15～16min，40％A相-60％B相，16～30min100％B相；波長：初始338nm，16.5min時262nm；流速：1ml·min^-1；柱溫：20～25℃；

供試品溶液的制備：取4粒脈血康膠囊去殼，精密稱取內容物粉末1.0g，加0.9％生理鹽水50ml浸泡24h，勻漿，以3000r·min離心10min，收集上清液；所余沉淀再以30ml乙醇60℃回流2次，每次30min，合并提取液，濾過，揮去乙醇至無醇味，放至室溫后加入上述上清液溶解即得提取液；精密量取脈血康膠囊提取液50μl置于有蓋小瓶，加含1％苯酚的6mol·L^-1鹽酸200μl，沖氮氣1min，壓蓋后置于恒溫反應器中，110℃反應20h，取出后加入40％氫氧化鉀溶液120μl，渦旋8～10min，濾過，取續濾液作為供試品溶液；

對照品溶液的制備：精密量取氨基酸標準品2ml，無需做任何處理，直接進樣；

測定法：分別取待測供試品溶液和對照品溶液各5μl，置于自動進樣瓶中，進樣測定，即得；

多糖含量測定

供試品溶液的制備：取膠囊內容物粉末2.0g，精密稱定，置于索式提取器中，加入60～90℃的石油醚120ml回流提取8h，棄取石油醚，殘渣揮干石油醚，再置于圓底燒瓶中，加蒸餾水50ml回流提取3次，每次1h，合并提取液，濾過，濾液濃縮至50ml，加氯仿50ml萃取3次，取上清液置于100ml量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置冰箱內備用；

對照品溶液的制備：精密稱定葡萄糖對照品0.0035g，加蒸餾水溶解，定容于25ml量瓶中，即得濃度為0.140mg·ml^-1的葡萄糖對照品溶液；

測定法：分別量取對照品溶液和樣品供試液0.5ml于試管中，加蒸餾水1ml，精密加入苯酚1.0ml，迅速加入濃硫酸5.0ml搖勻，冷卻至室溫；同法制備空白溶液，置于沸水加入15min，冷卻；在487nm處測定吸收度值，即得。