[發明專利]一種氫氧化鋁納米膠佐劑的制備方法

有效

• 申請號: 201210542216.1
• 申請日: 2012-12-14
• 公開（公告）號: CN102988982A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 郎景民;馬景霞;張靜
• 申請（專利權）人: 山東濱州沃華生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;C01F7/02
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 張建成

技術領域

本發明屬于動物生物制品免疫佐劑制備工藝技術領域，具體涉及一種氫氧化鋁納米膠佐劑的制備方法。

背景技術

佐劑最初是由?Gaston?Ramon作為與特異性抗原聯合應用的一種物質而進行敘述的，而與佐劑聯合應用的特異性抗原此時所產生的免疫應答比其單獨應用時要高得多。一般而言，佐劑本身并不提供免疫，只有在與免疫原組成一種制劑時，它們才能夠改善由疫苗誘導產生的免疫應答的廣度和效力。

目前臨床上應用的疫苗用免疫佐劑多為白油佐劑、氫氧化鋁佐劑、類脂佐劑和蜂膠佐劑等。白油佐劑免疫原性好，但是毒副作用大；氫氧化鋁膠佐劑免疫原性好，副作用小，但不能誘導細胞免疫；類脂佐劑和蜂膠佐劑免疫原性好，可誘導體液免疫和細胞免疫，免疫持續時間長，但原材料價格昂貴。因此近年來，各國科研工作者應用不同原料和采用不同方法研制了一系列新型免疫佐劑，但均因為效果不理想或者毒力太大，沒有一種得到得到廣泛應用。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提出了一種氫氧化鋁納米膠佐劑的制備方法，該方法制備出緩釋作用更強的納米級動物疫苗佐劑，所得的產物粒徑分布均勻、純度高，吸附力強，無副作用，應用效果好。

本發明的技術方案是通過如下步驟來實現的：

（1）配制明礬溶液：將固體明礬投入水中，通入蒸汽吹沸溶解，調節明礬溶液濃度至25%-28%，使明礬溶液溫度保持在60～65℃之間；

配制純堿溶液：通入蒸汽吹沸溶解堿液，調節濃度至10-12%，使純堿溶液溫度保持在50～55℃之間；

（2）化合：將調節好溫度的礬堿溶液和堿液，用內徑為20mm的膠管互相吻合，以相同流速通過沖擊擋板流入不銹鋼容器中內，邊化合邊用高速剪切機對混合溶液進行高速剪切，化合完畢后繼續剪切30分鐘，化合后溶液溫度應在49±1℃，pH值為6-7；

（3）熟化：向剪切后的溶液中直接插入蒸汽管通入蒸汽，對溶液進行熟化，驅除CO₂，至沒有大量氣泡產生為止；

（4）冷卻：向熟化膠液中加冷水使熟化膠液溫降至75℃以下，攪拌均勻后測PH；

（5）分裝：用水泵將熟化膠液送入六個帆布袋內，待熟化膠母液控干后，對剩余熟化膠進行洗滌；

（6）洗滌：母液控干后即可進行洗滌，洗滌水溫控制在50～55℃，每次洗滌間隔2.5～3小時，洗滌時用攪棒打碎膠鹽，攪拌均勻，將水放滿膠袋，洗完六次，檢查硫酸鹽合格后，停止洗滌；

（7）收膠：把洗滌好的膠控干，用膠袋收起壓在磅秤上，使膠脫水，至脫水后膠量位明礬投料量的2～2.5倍時進行收膠，膠經檢驗合格后即可使用。

其中上述步驟（3）中對溶液進行熟化至膠態變稀、發灰、青亮時停止通入蒸汽，吹沸后PH為7.?6～7.8。

其中上述步驟（4）中冷卻后熟化膠液PH較熟化時膠液PH低或不變。

本發明所述技術方案的有益效果為：本發明在常規氫氧化鋁膠佐劑的基礎上，設計了一種緩釋作用更強的納米級動物疫苗佐劑制備方法，制備的氫氧化鋁納米膠佐劑與普通氫氧化鋁膠佐劑配置的傳染性滅活疫苗相比，提供吸附力更強，抗體水平結果顯示納米級氫氧化鋁膠佐劑組明顯好于普通氫氧化鋁膠組，高出2～8個抗體滴度；用緩釋作用更緩慢的納米級佐劑生產疫苗，能提高滅活疫苗的質量，增強疫苗的免疫效力，延長兔疫持續期，較普通鋁膠組長60天左右；另外用本制備方法所得的產物粒徑分布均勻、純度高，粒徑主要集中于50～100nm左右，在免疫佐劑方面有較好的應用前景。

具體實施方式

為了使本發明的技術方案更加清楚明白，下面結合結合傳染性鼻炎滅活疫苗實例對本發明作進一步說明。

一、疫苗制備

?1、制備抗原：

（1）菌液培養：將生產種子接種于半合成培養基封好瓶口并搖勻，置37℃溫室中靜止培養18小時左右，期間每個6～8小時搖晃一次。當眼觀菌液呈現混濁的淡黃色時即達到生長高峰，準備收獲，此時含菌量可以達到10億/ml左右。

（2）制苗菌液的濃縮與滅活：用濃縮機將純檢合格的菌液進行濃縮，然后再用PH為7.2的生理鹽水制成懸浮液，使40～50億/ml菌體，通過比濁法測定最終的含菌量。再按體積比加入2‰的甲醛溶液進行滅活，混勻后于37℃滅菌1天，于2～8℃下放置1天，經檢驗無菌生長作為制苗抗原。

2、制備氫氧化鋁膠

（1）配制明礬溶液：將固體明礬投入水中，通入蒸汽吹沸溶解，調節明礬溶液濃度至25%-28%，使明礬溶液溫度保持在60～65℃之間；