[發明專利]以多聚賴氨酸為載體的雙酚A包被抗原制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201210540608.4
• 申請日: 2012-12-14
• 公開（公告）號: CN103048445A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發明（設計）人: 趙肅清;周劍青;張磊;張焜;周麗華
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 黃為

1.一種以多聚賴氨酸為載體的雙酚A包被抗原制備方法及其應用，其特征在于，以多聚賴氨酸為載體蛋白，與雙酚酸偶聯制備雙酚A包被抗原。

2.根據權利要求1所述的以多聚賴氨酸為載體的雙酚A包被抗原制備方法及其應用，其特征在于，依次包括下述步驟：1）將雙酚酸完全溶解在有機溶劑中；2）將NHS和EDC·HCL分別完全溶解在機溶劑中；3)將步驟2）制得的溶液滴加至步驟1）制得的溶液中，室溫避光攪拌1-24h，離心分離取上清液得A液；4）將多聚賴氨酸溶于磷酸緩沖溶液中成B液；5）將步驟3）制備的?A液滴加B液中，室溫避光攪拌1-24h，離心分離，上清液轉移到透析袋，用磷酸緩沖溶液透析24-96h，每12?h換一次透析液，最后將透析液經冷凍干燥得到雙酚A人工包被抗原即BVA-PLL；

其中：雙酚酸與NHS、EDC·HCL、多聚賴氨酸的摩爾比為：30～200﹕30～400﹕30～400﹕1。

3.根據權利要求1或2所述的以多聚賴氨酸為載體的雙酚A包被抗原制備方法及其應用，其特在在于，所述的多聚賴氨酸為多聚左旋賴氨酸或者多聚右旋賴氨酸或者多聚左旋賴氨酸和多聚右旋賴氨酸混合使用。

4.根據權利要求2所述的以多聚賴氨酸為載體的雙酚A包被抗原制備方法及其應用，其特在在于，步驟1）和步驟2）所述的有機溶劑為四氫呋喃或者N,N-二甲基甲酰胺或者二甲基亞砜的其中之一。

5.根據權利要求2所述的以多聚賴氨酸為載體的雙酚A包被抗原制備方法及其應用，其特在在于，步驟4）和步驟5）所述的磷酸緩沖溶液的?pH值為6-8。

6.權利要求1所述的以多聚賴氨酸為載體的雙酚A包被抗原的應用，其特征在于，應用雙酚A包被抗原作為雙酚A酶聯免疫檢測試劑盒，所述的雙酚A酶聯免疫檢測試劑盒由包被抗原的固相載體、抗體工作液、雙酚A標準溶液、酶標二抗溶液、抗體稀釋液、洗滌濃縮液、底物溶液和終止液組成；

其中：所述的固相載體為包被有雙酚酸與多聚左旋賴氨酸偶聯物的96孔聚苯乙烯酶標板，并封閉了微孔表面未吸附雙酚A?抗原的位點；所述的雙酚A?標準溶液的濃度分別為：0ng/mL，?3ng/mL，?8ng/mL，25ng/mL，75ng/mL，224ng/mL，673ng/mL，2018ng/mL。

7.根據權利要求6所述的以多聚賴氨酸為載體的雙酚A包被抗原的應用，其特征在于，所述的抗體工作液為兔源多克隆抗雙酚A的抗體。

8.根據權利要求6所述的以多聚賴氨酸為載體的雙酚A包被抗原的應用，其特征在于，所述的底物液為含有四甲基聯苯胺和過氧化氫的pH5.0磷酸檸檬酸緩沖溶液；所述的終止液為2mol/L硫酸溶液。

9.根據權利要求6所述的以多聚賴氨酸為載體的雙酚A包被抗原的應用，其特征在于，所述的洗滌濃縮液為10X含5%?吐溫-20，pH7.0，濃度為0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液。

10.根據權利要求6所述的以多聚賴氨酸為載體的雙酚A包被抗原的應用，其特征在于，所述的酶標二抗溶液為羊抗兔-辣根過氧化物酶。