[發(fā)明專利]一種固定化酶及制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210537509.0
• 申請日: 2012-12-12
• 公開（公告）號: CN103013971A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設計）人: 吳松海;臧金金;任海濤;韓煦;劉勇
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N11/08
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

1.一種固定化酶的制備方法，其特征是包括如下步驟：

(1)按比例將10g平均聚合度為1750±50的聚乙烯醇加入100-150mL水中，攪拌下加熱至75-85℃，保溫1.5-2.5h，加入1-5mL?3-氨丙基三乙氧基硅烷，再滴加1-2mL、濃度為1mol/L鹽酸水溶液，攪拌0.5-2.5h，得到改性聚乙烯醇的溶液；

(2)按比例將50mL所述改性聚乙烯醇溶液與50-250mL殼聚糖溶液混合，攪拌1-2h，抽真空除去溶液中的氣泡，得到均相的混合液，將30mL所述均相混合液滴于100-150mL氫氧化鈉溶液中，固化1-3h，用蒸餾水洗至中性，過濾，得到復合小球載體；

所述殼聚糖溶液是用下述方法制成：將1-4g脫乙酰度≥85%的殼聚糖加入100mL水中，在攪拌下加入1-3mL冰醋酸，繼續(xù)攪拌2-3h，得到殼聚糖溶液；

所述氫氧化鈉溶液是用下述方法制成：將6-12g氫氧化鈉溶解于100mL水中，再加入20mL乙醇混合均勻；

(3)按比例將4g所述復合小球載體置于20-50mL、質量濃度為1%-5%的戊二醛-緩沖液溶液中，震蕩活化1-5h，用緩沖液洗3-5次，除去未反應的戊二醛，得到活化后的載體小球；

(4)按比例將4g所述活化后的載體小球置于10-50mL、濃度為0.25-1.25mg/mL的酶-緩沖液溶液中，震蕩10-20h，用緩沖液洗3-5次，除去未交聯(lián)的酶，得到的固定化酶小球真空凍干；

所述緩沖液為pH=7.0的磷酸鹽緩沖液。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述步驟（1）為：按比例將10g平均聚合度為1750±50的聚乙烯醇加入125mL水中，攪拌下加熱至80℃，保溫2h，加入3mL?3-氨丙基三乙氧基硅烷，再滴加1.5mL、濃度為1mol/L鹽酸水溶液，攪拌1.5h，得到改性聚乙烯醇的溶液。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述步驟（2）為：按比例將50mL所述改性聚乙烯醇溶液與150mL殼聚糖溶液混合，攪拌1.5h，抽真空除去溶液中的氣泡，得到均相的混合液，將30mL所述均相混合液滴于125mL氫氧化鈉溶液中，固化2h，用蒸餾水洗至中性，過濾，得到復合小球載體；

所述殼聚糖溶液是用下述方法制成：將3g脫乙酰度≥85%的殼聚糖加入100mL水，在攪拌下加入2mL冰醋酸，繼續(xù)攪拌2.5h，得到殼聚糖溶液；

所述氫氧化鈉溶液是用下述方法制成：將9g氫氧化鈉溶解于100mL水中，再加入20mL乙醇，混合均勻。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述步驟（3）為：按比例將4g所述復合小球載體置于35mL、質量濃度為3%的戊二醛-緩沖液溶液中，震蕩活化3h，用緩沖液洗4次，除去未反應的戊二醛，得到活化后的載體小球。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述步驟（4）為：按比例將4g所述活化后的載體小球置于30mL、濃度為0.75mg/mL的酶-緩沖液溶液中，震蕩10h，用緩沖液洗4次，除去未交聯(lián)的酶，得到的固定化酶小球真空凍干；

所述緩沖液為pH=7.0的磷酸鹽緩沖液。

6.根據(jù)權利要求1或5所述的方法，其特征是所述酶為過氧化氫酶、纖維素酶、木瓜蛋白酶或糖化酶。

7.權利要求1-6之一的方法制備的固定化酶。