[發明專利]一種用于檢測EB病毒Rta-IgG抗體的反應載體及試劑盒

有效

• 申請號: 201210533496.X
• 申請日: 2012-12-11
• 公開（公告）號: CN103134936A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 賈鳳芹;李全;焦守恕
• 申請（專利權）人: 同昕生物技術（北京）有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

技術領域

本發明涉及醫學免疫學與體外血清學診斷技術領域，具體地，涉及一種用于檢測EB病毒Rta-IgG抗體的反應載體及試劑盒。?

背景技術

鼻咽癌（nasopharygeal?carcinoma,NPC）是指發生于鼻咽腔頂部和側壁的惡性腫瘤,多發于東南亞地區，與食道癌、肝癌并稱為中國三大腫瘤，在我國南方各種惡性腫瘤中占第一位。?

經多年研究發現，鼻咽癌與EB病毒關系最為密切，EB病毒被激活感染鼻咽部細胞，由潛伏期進入裂解復制狀態時，導致鼻咽部細胞發生異常分裂增生造成癌變。鼻咽癌患者血清中具有針對多種EB病毒抗原的抗體譜，一般通過檢測血清EB病毒抗體來評估患鼻咽癌的危險度，為鼻咽癌的診斷提供了有效的檢測指標。申請號為200610113403的發明專利公開了Rta是EB病毒剛剛進入裂解復制狀態時就表達的立即早期基因BRLF1的編碼轉錄激活蛋白，是EB病毒進入裂解復制狀態必需的激活元件而且僅在鼻咽癌發生時表達。經大量臨床試驗已經證明檢測血液中的抗EB病毒Rta-IgG抗體對診斷鼻咽癌具有極高的特異性。?

鼻咽癌患者的生存年限與鼻咽癌的分期有很大關系，一般來說，Ⅰ期鼻咽癌的5年生存率高達80-90%，而Ⅳ期鼻咽癌的5年生存率就只有40-50%。并且鼻咽癌的復發率很高，80%的鼻咽癌都會發生淋巴結轉移。這樣對鼻咽癌患者的治療效果監測提出了較高的要求，只有對治療效果有一個高效、穩定的實時監測，才能讓醫生根據病情發展程度及患者自身的免疫能力選擇科學規范的治療方法。?

經大量的臨床跟蹤研究，在鼻咽癌病人血清中具有高滴度的Rta抗體，且Rta抗體含量同治療周期有一定的相關性，隨著治療時間和治療程度的增加，NCP病人體內的Rta抗體含量有逐漸減少的趨勢。這樣通過測定鼻咽癌病人血清中EB病毒Rta-IgG抗體含量可以對鼻咽癌患者的治療效果進行實時監測。然而，目前市場上還沒有能滿足以上需求的對EB病毒Rta-IgG抗體定量檢測的試劑盒。?

發明內容

根據上述領域的需求和空白，本發明提供一種用于檢測EB病毒Rta-IgG抗體的反應載體及試劑盒。本發明的EB病毒Rta-IgG定量檢測試劑盒填補了以上市場空白，并且經臨床實驗證明，操作簡便，靈敏度高，特異性好。?

一種用于免疫檢測EB病毒Rta-IgG抗體的反應載體，其特征在于，所述反應載體上包被有基因重組EB病毒Rta蛋白，所述基因重組EB病毒Rta蛋白為保藏號為：CGMCC6955的CHO細胞株CHO/RTA表達所得。?

所述免疫檢測指酶聯免疫檢測，其特征在于，其制備步驟包括包被和封閉，所述包被采用0.05～0.25μg/ml的所述基因重組EB病毒Rta蛋白的包被液。?

所述包被指將基因重組EB病毒Rta蛋白溶于pH值為9.0～9.6的，0.1mol/L碳酸鹽緩沖液制成包被液，然后裝載于所述反應載體的反應孔中。?

所述封閉采用的封閉液為含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液，所述牛血清白蛋白在所述封閉液中的終濃度為1～10%，所述終濃度為質量百分比濃度。?

一種用于定量檢測EB病毒Rta-IgG抗體的試劑盒，其特征在于，包括有權利要求1～4任一所述反應載體。?

上述試劑盒還包括標有單位濃度的EB病毒Rta-IgG校準品溶液、酶標記的抗人IgG，底物顯色液、終止液、樣品稀釋液及濃縮洗滌液。?

所述酶標記的抗人IgG在酶標記中所用的標記酶為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酯酶。?

當標記酶為辣根過氧化物酶時，所述顯色液由顯色A液和顯色B液組成，顯色液A液為過氧化氫或過氧化脲，顯色B液為鄰苯二胺或四甲基聯苯胺，終止液為1～2mol/L硫酸或者鹽酸溶液；辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG的工作稀釋度為1：5000～1:80000。?

當標記酶為堿性磷酸酯酶時，顯色液為硝基磷酸鹽緩沖液，終止液為1～2mol/L氫氧化鈉溶液。?

上述試劑盒，所述EB病毒Rta-IgG校準品溶液為6瓶，1ml/瓶，其濃度分別為0U/ml、12.5U/ml、25U/ml、50U/ml、100U/ml、200U/ml，所述樣品稀釋液為含0.3M?NaCl的50mM的磷酸鹽緩沖液，所述濃縮洗滌液為pH值為7.2～8.5，并且包含有Proclin300和吐溫-20的0.01～0.03mol/L的磷酸鹽緩沖液，所述Proclin300在所述濃縮洗滌液中的終濃度為0.02～0.05%，所述吐溫-20在所述濃縮洗滌液中的終濃度為1.0～2.0%，所述終濃度均為體積百分比濃度。?