[發(fā)明專利]用于顯微檢查生物樣本的樣本載體和方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210530003.7
• 申請日: 2012-09-24
• 公開（公告）號: CN103123307A
• 公開（公告）日: 2013-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: W·岡布雷赫特;K·希爾陶斯凱;D·西克特
• 申請（專利權(quán)）人: 西門子公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N21/64;G02B21/34
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 賈靜環(huán)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種根據(jù)權(quán)利要求1前序部分的用于顯微檢查生物樣本的樣本載體，以及涉及一種用于在生物樣本中識別熒光標記的物體的方法。

背景技術(shù)

將微粒(如細胞、細菌等)從生物液體(如血液或尿液)中分離如今越來越多地通過微過濾(Mikrofiltration)進行。在此利用這一點，即，所需的微粒，例如在血液中循環(huán)的腫瘤細胞明顯大于大多數(shù)其余存在于生物液體中的微粒或細胞。如此通過過濾而分離出的微粒接下來可利用通常的細胞學或免疫化學的方法著色且緊接著可在顯微鏡下觀察、識別和記錄。

大多使用薄的高分子薄膜以用于微過濾，該高分子薄膜具有所期望數(shù)量級的孔隙率。在過濾之后將微過濾器轉(zhuǎn)移到載玻片上，以便可在顯微鏡中觀察該微過濾器。

該步驟費事且此外還帶有這樣的風險，即，轉(zhuǎn)移有缺陷或損壞膜。

在分析通過微過濾獲得的微粒時的另一問題在于較大的過濾面積(須在顯微鏡中在該過濾面積上找到微粒)。在許多應(yīng)用中，所需的微粒的數(shù)量是這樣少，使得必須充分利用整個過濾面積，以便得到可用且可靠的結(jié)果。由于所需的微粒相對于過濾面積來說較小，須制出過濾面積的數(shù)量較多的明顯放大的顯微圖像，以便一方面涵蓋整個過濾面積且另一方面不遺漏一個所需的微粒。這一點也非常費時且費工。

現(xiàn)有技術(shù)DE?10?2010?001?322?A1中公開了一種微過濾器，該微過濾器直接與用于顯微鏡的載玻片一體化。由此可取消將過濾器轉(zhuǎn)移到載玻片上這一復(fù)雜步驟。然而即使在這類過濾裝置中也總是存在這樣的問題，即，利用顯微照片涵蓋整個過濾面積是極其耗時和復(fù)雜的。

因此本發(fā)明的目的在于，提供一種開頭所提及的形式的樣本載體以及方法，利用該樣本載體和方法，能特別迅速地探測到在生物樣本中的已標記的微粒。

發(fā)明內(nèi)容

該目的通過帶有權(quán)利要求1的技術(shù)特征的樣本載體以及通過帶有權(quán)利要求10的技術(shù)特征的方法實現(xiàn)。

這類用于在顯微鏡下檢查生物樣本的樣本載體包括帶有至少一個凹口的基體，在該凹口中設(shè)置有濾膜，該濾膜與樣本載體的表面基本對齊地端接(abschlieβen)。根據(jù)本發(fā)明，在此這樣設(shè)置，即，樣本載體構(gòu)造成圓形。樣本載體的圓形造型使得以下成為可能，即對過濾表面進行特別迅速的顯微掃描。與由現(xiàn)有技術(shù)中已知的、帶有一體化的微過濾器的載玻片不同的是，這類樣本載體則可旋轉(zhuǎn)地容納在熒光顯微鏡等之下，從而與容納在傳統(tǒng)的十字工作臺上的載物臺()相比，可明顯更迅速地進行整個過濾表面的掃描。為此，載玻片只須旋轉(zhuǎn)移動，其中，樣本載體和顯微鏡之間沿徑向方向的相對運動就足夠在顯微鏡下獲取樣本載體的整個面積。此外這一點在機械上也特別簡單。

樣本載體優(yōu)選具有在中心的圓形通孔。相應(yīng)的驅(qū)動軸的心軸(Dorn)可接合到該通孔中，從而使得用于分析的樣本載體旋轉(zhuǎn)地移動。

該通孔優(yōu)選具有15mm的直徑和1.2mm的邊緣高度。這一點與光盤標準或DVD標準或藍光標準相符，從而用于操作這類樣本載體的工具可以特別簡單且價格上有利的方式由本來產(chǎn)量就很大且因此特別便宜的構(gòu)件制造。當然，另外的尺寸或與另外的標準相匹配也是可以的。

在本發(fā)明另一優(yōu)選的實施形式中，至少一個凹口以及相關(guān)聯(lián)的濾膜為圓形的。這使得以特別簡單的方式將待過濾的液體均勻施覆在濾膜上成為可能，這例如可簡單地通過移液到圓形膜的中心進行。

為此，至少一個凹口以及相關(guān)聯(lián)的濾膜也可備選地形成與樣本載體同心的環(huán)。這在另一方面有助于掃描在旋轉(zhuǎn)的樣本載體上的膜表面，因為在樣本載體單獨轉(zhuǎn)動期間可連續(xù)且不間斷地檢測膜表面。

至少一個凹口優(yōu)選具有用于濾液的流出通道。這使得在無殘留物的情況下觀察作為滲余液保留在過濾表面上的細胞或其余微粒成為可能。

在本發(fā)明另一優(yōu)選的實施形式中，在至少一個凹口中設(shè)置有用于支撐濾膜的支撐體，這使得使用特別薄且脆弱的濾膜成為可能，該濾膜由于有支撐體而能無困難地經(jīng)受住在涂覆樣本、過濾和旋轉(zhuǎn)掃描期間的載荷。

濾膜優(yōu)選具有最大20μm，優(yōu)選5μm至20μm的孔徑。這類過濾器尤其適用于將從血液中沖洗出的腫瘤細胞分離出，因為大部分白細胞、紅細胞和另外的細胞狀的血液成分可無困難地穿過這類過濾器，而明顯較大的腫瘤細胞則保留在過濾表面上。

為了有助于顯微檢查，基體優(yōu)選由透明材料，尤其是玻璃、聚碳酸酯等構(gòu)造成。