[發明專利]一種工業化生產石斑魚生長激素重組基因蛋白的方法

無效

• 申請號: 201210515989.0
• 申請日: 2012-12-03
• 公開（公告）號: CN103014058A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 石和榮;張勇;趙會宏;潘忠超
• 申請（專利權）人: 廣東現代農業集團研究院有限公司
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12R1/84
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 湯喜友

1.一種工業化生產石斑魚生長激素重組基因蛋白的方法，包括以下步驟：

1）構建克隆載體pGEMT-gGH；

2）構建酵母表達載體pPICZaA-gGH；

3）獲取含重組石斑魚生長激素基因的畢赤酵母菌株：將表達載體pPICZaA-gGH通過電擊轉化到畢赤酵母細胞X33中，在轉化子中選出陽性轉化子，然后在陽性轉化子中選出多拷貝轉化子，檢測多拷貝轉化子的表型，對多拷貝轉化子進行誘導表達，并驗證表達產物，獲得含重組石斑魚生長激素基因的畢赤酵母菌株；?

4）自控罐發酵：含重組石斑魚生長激素基因的畢赤酵母菌株進行搖瓶培養，然后接入50-100L自控罐發酵，加入甲醇作為碳源誘導畢赤酵母，獲得石斑魚生長激素基因重組蛋白；其中發酵條件控制為：溫度28-31.5℃，pH5-6.5，溶氧30-40%,?發酵時間80-90h；

5）后處理：發酵后的重組蛋白經過冷凍離心分離，之后再經過低溫噴霧干燥得到石斑魚生長激素重組蛋白。

2.根據權利要求1所述的工業化生產石斑魚生長激素重組基因蛋白的方法，其特征在于：所述搖瓶培養中發酵培養基的體積為25-30L，接種量為1.5-1.8L。

3.根據權利要求1所述的工業化生產石斑魚生長激素重組基因蛋白的方法，其特征在于：所述甲醇的體積占發酵液體積的0.55%-0.7%。

4.根據權利要求1所述的工業化生產石斑魚生長激素重組基因蛋白的方法，其特征在于：獲得的石斑魚生長激素基因重組蛋白表達量為1.5-2.0g/L。

5.根據權利要求1-4任一項所述的工業化生產石斑魚生長激素重組基因蛋白的方法，其特征在于所述發酵條件控制為：溫度29.5-30.5℃，pH5.5-6.0，溶氧30-40%,?發酵時間80-90h。

6.根據權利要求1所述的工業化生產石斑魚生長激素重組基因蛋白的方法，其特征在于：步驟5）冷凍離心分離時的溫度為4℃。

7.根據權利要求1所述的工業化生產石斑魚生長激素重組基因蛋白的方法，其特征在于其還包括在發酵過程中檢測菌株濕重的步驟：在發酵過程中連續三次測取菌種濕重，當菌株濕重在59%～59.75%之間，并成下降趨勢時，終止發酵。