[發(fā)明專利]一種提高抗肝片吸蟲(chóng)病DNA疫苗免疫保護(hù)率的疫苗組合及制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210510136.8
• 申請(qǐng)日: 2012-12-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103203028A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅洪林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西南大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;A61K39/39;A61K39/00;A61P33/10;C12N15/79;C12N15/57
• 代理公司: 重慶華科專利事務(wù)所 50123
• 代理人: 康海燕

1.一種提高編碼肝片吸蟲(chóng)Cat?L1（FhCat?L1）DNA疫苗保護(hù)率的疫苗組合，所述疫苗組合為pVAX1-Cat?L1+pIL4+pFlt3L，其是采用能誘導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）成熟、增加DC數(shù)量和頻率的Flt3L及能誘導(dǎo)宿主免疫反應(yīng)趨向Th2的細(xì)胞因子IL4作為Cat?L1（FhCat?L1）DNA疫苗的分子佐劑，提高抗肝片吸蟲(chóng)病DNA疫苗的保護(hù)率。

2.一種制備提高編碼肝片吸蟲(chóng)Cat?L1（FhCat?L1）DNA疫苗保護(hù)率的疫苗組合的方法，其特征在于所述包括以下步驟：

1）編碼IL4、Flt3L的真核質(zhì)粒的構(gòu)建：小鼠IL4序列采用特異性克隆引物(P3，P4),?P3-5'?CACCATG?GGT?CTC?AAC?CCC?CA?3'，P4-?5'?CTA?CGA?GTA?ATC?CAT?TTG?CA?3';?小鼠Flt3L序列采用特異性克隆引物(P5，P6),?P5-5'?CACCATG?ACA?GTG?CTG?GCG?CCA?GC?3'，P6-5'?CTA?GGG?ATG?GGA?GGG?GAG?GG?3'；在克隆引物P3，P5分別引入接頭序列pcDNA3.1的CACC；獲得的小鼠IL4/Flt3L基因回收后連接入pVAX1質(zhì)粒，構(gòu)建得到pVAX1-IL4和pVAX1-Flt3L；

2）編碼候選基因Cat?L1的真核質(zhì)粒的構(gòu)建：其中，特異性克隆引物(P1，P2)，P1-?5'?CACCGGATCCGTA?CTG?ACT?ATT?GGA?TTG?TG?3',?P2-5'?CC?GAATTCTCA?CGG?AAA?TCG?TGC?CAC?CA?3',?在克隆引物P1，P2的上下游分別引入BamH?I和EcoR?I酶切位點(diǎn)；擴(kuò)增得到的Cat?L1基因回收后連接入pMD18-T載體，得到pMD-Cat?L1，再將Cat?L1基因從pMD-Cat?L1亞克隆入pVAX1質(zhì)粒獲取pVAX1-Cat?L1質(zhì)粒；

3)?利用大腸桿菌工程菌（Escherichia?coli）和真核細(xì)胞Cos7表達(dá)Cat?L1蛋白；

4)Cat?L1多克隆抗體的制備；

5)純化和鑒定Cat?L1蛋白；

6)獲得疫苗組合pVAX1-Cat?L1+pIL4+pFlt3L。