[發(fā)明專利]一種毛柄金錢菌菌株及制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210503826.0
• 申請日: 2012-12-02
• 公開（公告）號: CN102986536A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張微思;郭永紅;羅孝坤;羅曉莉;尚陸娥
• 申請（專利權(quán)）人: 中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所;云南省供銷合作社科學(xué)研究所;昆明菌苑食品有限公司
• 主分類號: A01H15/00
• 分類號: A01H15/00;A01G1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及毛柄金錢菌菌株KML-19及制備方法。?

背景技術(shù)

毛柄金錢菌Flammulina?velutipes別名又稱毛柄小火菇、構(gòu)菌、樸菇、冬菇、樸菰、凍菌、金菇、智力菇等，屬傘菌目白蘑科金針菇屬。毛柄金錢菌營養(yǎng)豐富，清香撲鼻。其菌蓋小巧細膩，黃褐色或淡黃色或白嫩。不僅味道鮮美，而且營養(yǎng)豐富，是拌涼菜和火鍋食品的原料之一?

在毛柄金錢菌栽培技術(shù)中，優(yōu)良菌種的獲得是關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)。毛柄金錢菌菌株的獲得通常是利用子實體或孢子進行分離、純化，直接應(yīng)用于毛柄金錢菌的栽培或菌絲體生產(chǎn)。現(xiàn)有技術(shù)的不足在于其生物學(xué)特性目前仍處于試驗研究階段，生物轉(zhuǎn)化率較低，而且還要用熟料栽培，生產(chǎn)工藝及技術(shù)要素要求較高，因而制約了毛柄金錢菌商品經(jīng)濟的發(fā)展。另外只能根據(jù)菌絲形態(tài)及分離物來初步確定是否為毛柄金錢菌純培養(yǎng)物；生產(chǎn)的菌種一般用固體菌種。目前在國內(nèi)采用液體菌種進行毛柄金錢菌資源的保護應(yīng)用不廣泛。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的就是克服現(xiàn)有技術(shù)不足，利用云南原產(chǎn)地毛柄金錢菌子實體篩選出優(yōu)良菌株，采用生物技術(shù)進行菌種鑒定，制備毛柄金錢菌液體及固體優(yōu)良菌種，為毛柄金錢菌資源保護提供優(yōu)良菌種?

本發(fā)明采用的真菌是毛柄金錢菌Flammulina?velutipes?KML-19；保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址：中國北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學(xué)院微生物研究所；保藏日期：2012年10月11日；保藏登記入冊的編號CGMCC?No.6704

毛柄金錢菌的子實體由菌蓋、菌褶、菌柄三部分組成，多數(shù)成束生長，肉質(zhì)柔軟有彈性。菌蓋呈球形或呈扁半球形，直徑1.5～7厘米，幼時球形，逐漸平展，過分成熟時邊緣皺折向上翻卷。菌蓋表面有膠質(zhì)薄層，濕時有粘性，色黃白到黃褐，菌肉白色，中央厚，邊緣薄，菌褶白色或象牙色，較稀疏，長短不一，與菌柄離生或彎生。菌柄中央生，中空圓柱狀，稍彎曲，長3.5～15厘米，直徑0.3～1.5厘米，菌柄基部相連，上部呈肉質(zhì)，下部為革質(zhì)，表面密生黑褐色短絨毛，擔孢子生于菌褶子實層上，孢子圓柱形，無色

本發(fā)明的技術(shù)方案：

①???采集野生毛柄金錢菌子實體；

②???組織分離或孢子分離；

③???純化菌株及菌株鑒定；

④???生物學(xué)特性比較及生產(chǎn)性狀比較；

⑤???確定優(yōu)良菌株；

⑥???菌種生產(chǎn)及菌種應(yīng)用；?

經(jīng)過反復(fù)篩選，獲得菌絲體產(chǎn)量高、抗污染的毛柄金錢菌液體菌種專用菌株KML-19

本發(fā)明真菌Flammulina?velutipes培養(yǎng)方法(以下為重量百分比):

菌種分離純化培養(yǎng)基：2%毛柄金錢菌下腳料、0.001%VB1、2%葡萄糖、2%瓊脂；

毛柄金錢菌菌株分離及鑒定方法：

1、將毛柄金錢菌子實體組織塊或孢子液接種到上述試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，于18-24℃下培養(yǎng)5-10天，對分離培養(yǎng)的試管每天觀察記錄，及時剔除已污染的試管，挑選出無污染、長勢良好的菌株，獲得毛柄金錢菌分離試管種

2、將分離試管種菌絲塊接種到上述瓊脂培養(yǎng)基的平板培養(yǎng)皿上進行菌種純化，2天后取尖端菌絲塊接種在培養(yǎng)基斜面上，于18-24℃下培養(yǎng)5-7天，獲得毛柄金錢菌純化試管種

3、采用供試子實體與對應(yīng)菌絲分離物，分別按SDS方法提取總DNA，進行PCR擴增及ITS序列測定，通過Blast對比樣品的ITS序列與GENBANK中的毛柄金錢菌(Flammulina?velutipes)?Identities=518/532(97%)，Gaps=8/532(1%)，分析確定分離得到的純培養(yǎng)物為毛柄金錢菌菌絲體

本發(fā)明毛柄金錢菌菌種的制備方法分為：液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)兩種

液體菌種制備方法：

液體培養(yǎng)基配方為：10~20%麩皮、10~20%土豆、0.5~1%蔗糖、10%玉米粉，余下為水，pH自然

1、將毛柄金錢菌的菌絲體接種到試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)基配方為PDA培養(yǎng)基，于18-24℃下培養(yǎng)5-7天，獲得試管菌種

2、將試管種接種到500ml三角瓶（每瓶裝200ml）液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基配方為前述液體培養(yǎng)基配方，于20-26℃下?lián)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為120-160r/min，培養(yǎng)時間5-7天