[發明專利]一種B族鏈球菌的檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201710342836.3
• 申請日: 2017-05-16
• 公開（公告）號: CN107132353A
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發明（設計）人: 張子林;廖漢明;張羽
• 申請（專利權）人: 張子林
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/533
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司44202
• 代理人: 溫旭

技術領域

本發明涉及微生物檢測試劑盒技術領域，具體涉及一種B族鏈球菌的檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

B族鏈球菌(GBS)又稱無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)，當機體免疫功能低下時，可引起皮膚感染、心內膜炎、產后感染、新生兒敗血癥和新生兒腦膜炎。孕婦直腸和陰道攜帶B族鏈球菌是引起新生兒侵襲性GBS感染的主要原因。GBS細菌可以從這些粘膜部位可上行進入子宮引起胎兒的宮內感染。同時，在分娩的過程中，新生兒經過母體GBS污染的產道，而獲得感染。在新生兒，細菌可入侵血液引起肺炎、敗血病、腦膜炎等嚴重侵襲性感染。具有發病率、病死率、致殘率高的特點，嚴重危害妊娠婦女和新生兒健康。因此通過盡早鑒別診斷和治療鏈球菌感染，可以顯著減輕癥狀，減少風濕熱、腎小球腎炎、風濕性心臟病等并發癥的產生。并對預防孕婦圍產期胎兒和新生兒的感染，降低新生兒死亡率有著重要的意義。

現有的檢測B族鏈球菌的技術方法主要有依靠細菌學鑒定方法以及分子生物學和利用B族鏈球菌特異性抗原檢測的免疫學方法(主要以膠體金等有色微球的免疫層析方法)。這些技術方法具有各自的特點，因此其在臨床應用中具有各自的優勢和劣勢。細菌微生物學鑒定方法主要依靠細菌的生理生化特性，從形態學和代謝生化反應作為判斷依據，這種鑒定方法需要將樣本經過合適條件培養24-48小時，再通過培養物是否具有相應的典型特征來辨別GBS，因此這種鑒定方法受到培養過程中各種非特異條件因素影響，尤其是很多健康人也攜帶GBS，而不適當的采集樣本技術可以導致真正感染GBS的標本報告處陰性的結果。這種方法整體操作耗時，判斷結果出現漏診錯診幾率高。在GBS的鑒定中還可以利用寡核苷酸探針來針對GBS特異性M蛋白基因的N端區域分型，提供一種高度特異性的分析方法。這種方法具有非常高的敏感性和特異性。但是其實驗過程須在分子實驗室進行，不利于臨床和門診快速應用。國內有采用膠體金免疫層析方法對GBS進行快速抗原檢測。其檢測不需要任何設備輔助，特異性較高，但是使用該種檢測方法靈敏度不高，重復性差，檢測范圍狹窄，不可定量檢測。而對于GBS微生物的臨床檢測，往往需要更高的檢測靈敏度，才能滿足臨床篩查的需求。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種B族鏈球菌的檢測試劑盒及其制備方法，本發明所述的試劑盒檢測方便快捷，檢測靈敏度高，特異性強，可重復性高，檢測結果客觀可靠，在B族鏈球菌體外診斷領域具有廣闊的應用前景。

為解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：

一種B族鏈球菌的檢測試劑盒，該試劑盒包括盒體和設置于盒體內的檢測試紙，所述檢測試紙包括底板、以及由左往右依次連接并設置在所述底板上的樣品墊、第一結合物墊、第二結合物墊、包被膜和吸水紙；所述第一結合物墊上含有Eu³⁺乳膠微球標記兔抗B族鏈球菌抗體，所述第二結合物墊上含有生物素化兔抗B族鏈球菌抗體；所述包被膜上由左往右依次設置有一條檢測T線和一條質控C線，所述檢測T線與質控C線平行排列，所述檢測T線上包被有用于與生物素化兔抗B族鏈球菌抗體結合的固相化鏈霉親和素，所述質控C線上包被有用于與Eu³⁺乳膠微球標記兔抗B族鏈球菌抗體結合的固相化羊抗兔IgG抗體。

作為本發明優選的實施方式，所述包被膜的兩端分別與第二結合物墊和吸水紙相互交疊連接，所述第二結合物墊上壓貼有第一結合物墊，所述第一結合物墊上壓貼有樣品墊。

作為本發明優選的實施方式，所述樣品墊為玻璃纖維墊或聚酯纖維墊。

作為本發明優選的實施方式，所述包被膜為硝酸纖維素膜。

作為本發明優選的實施方式，所述盒體上開設有向所述樣品墊添加樣品的加樣孔和用于觀察檢測結果的觀察窗口。

本發明還提供了一種如上所述的檢測試劑盒的制備方法，其包括以下步驟：

1)樣品墊制備：將樣品墊置于樣品墊處理液中浸泡或將樣品墊處理液均勻噴涂在樣品墊上，然后將含有樣品墊處理液的樣品墊置于溫度為37℃、相對濕度小于20％的環境中烘干3～5h，備用；其中，樣品墊處理液為含5％吐溫-20、1％BSA的pH為8.5的0.15mol/L硼酸鹽緩沖液或Tris-HCl緩沖液；