[發明專利]油藏中芽孢桿菌（Bacillus）的快速檢測方法

有效

• 申請號: 201210499739.2
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN102936630A
• 公開（公告）日: 2013-02-20
• 發明（設計）人: 張凡;佘躍惠;侯讀杰;柴陸軍
• 申請（專利權）人: 中國地質大學（北京）
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/64;C12Q1/04
• 代理公司: 北京鼎佳達知識產權代理事務所(普通合伙) 11348
• 代理人: 蔣常雪

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技術領域

本發明涉及一種油藏中芽孢桿菌（Bacillus）的檢測方法，具體涉及依靠培養的微生物學方法與不依靠培養的分子生物學方法相結合來揭示油藏中Bacillus多樣性的方法。

背景技術

隨著油藏中微生物的分離和檢測，研究人員發現油藏中同時存在著對原油開采有害和有益的微生物，一些微生物的代謝產物和代謝活性能被用來提高原油采收率。根據這一特點，微生物提高原油采收率（MEOR）作為三次采油的一種重要措施被提出并實施開來。

微生物提高原油采收率的主體是功能微生物菌群。根據以往的研究，芽孢桿菌（Bacillus）是微生物提高原油采收率的一類重要的微生物菌群。芽孢桿菌（Bacillus）能產生物表面活性劑降低原油與水以及巖石之間的界面張力，從而提高原油的流動性達到增加原油采收率的目的；芽孢桿菌（Bacillus）能降解長鏈烴減低原油粘度提高原油流動性來增加原油采收率；芽孢桿菌（Bacillus）還能產生生物聚合物選擇性地堵塞油藏中的大孔道，增加注入水的波及系數從而增加原油采收率。

對于微生物提高原油采收率的實驗室研究和礦場實驗研究而言，研究棲居在油藏中的微生物是發現功能微生物菌群以及設計微生物提高原油采收率礦場試驗實施方案的關鍵步驟。

傳統的依靠培養的微生物學方法已被用來分離和鑒定油藏中的微生物，但是這些方法對微生物的富集以及分離過程復雜，大部分情況下，需要配制專一性的培養基，選擇專一性的碳原，并且富集過程有時要經過幾十輪的培養。另外一個方面，采用傳統的微生物學培養方法僅能培養出自然界中很少的一部分微生物（少于1%）（Amann?et?al.，1995）。因此通過傳統微生物學方法僅揭示了油藏中很少的一部分微生物。

目前，分子生態學技術為微生物的檢測提供了新的方法，被廣泛用來研究自然環境中的微生物生態。研究人員也將這些方法用于油藏微生物多樣性研究，油藏中檢測到大量的不同系統發育類型的微生物種群。

然而，綜觀所有國內外關于油藏微生物多樣性研究的報道，出現了一個令人費解的結果，那就是利用不基于培養的分子生態學方法，油藏樣品中很少或幾乎沒有檢測到芽孢桿菌（Bacillus）。這些結果給人們一個印象就是油藏樣品中芽孢桿菌（Bacillus）很少或油藏中不存在芽孢桿菌（Bacillus）。

????當利用分子生態學方法研究環境樣品中微生物群落多樣性的時候，有兩個方面的原因可能造成油藏樣品中檢測不到芽孢桿菌（Bacillus），第一是，芽孢桿菌是一類革蘭氏陽性、能形成芽孢的微生物菌群，DNA抽提過程中芽孢的破壁率要比其它微生物小，因此芽孢桿菌在整個分析過程中很可能被忽略；第二，分子生態學方法不能檢測到環境樣品僅占比例為0.1%-1%微生物菌群（Head?et?al.，?1998）。

芽孢桿菌（Bacillus）是一類革蘭氏陽性、能形成芽孢、對微生物提高原油采收率有益的功能微生物菌群。利用不基于培養的微生物學方法沒有檢測到芽孢桿菌（Bacillus）的油藏是否真的不存在芽孢桿菌？能通過怎樣的方法來快速檢測油藏樣品中的少量芽孢桿菌菌群是目前研究人員所面臨的難題。

發明內容

本發明需要解決的技術問題就在于克服現有技術的缺陷，提供一種油藏中芽孢桿菌（Bacillus）的快速檢測方法，它將傳統的微生物學和分子生物學的優點相結合，提成了一種快速檢測油藏中的芽孢桿菌（Bacillus）?方法。本發明所述的方法能有效地檢測油藏中的芽孢桿菌（Bacillus），為油藏中采用功能芽孢桿菌（Bacillus）的發現，以及油藏中芽孢桿菌（Bacillus）的生態學研究提供了新的可行方法。

為解決上述問題，本發明采用如下技術方案：

本發明提供了一種油藏中芽孢桿菌（Bacillus）的快速檢測方法，所述方法包括下列步驟：

（1）油藏樣品的采集；

（2）通過高溫滅活樣品中除能形成芽孢的菌以外的其它微生物；

（3）收集滅活后樣品中的芽孢；

（4）將收集的芽孢接種于培養基、在油藏原位溫度條件下對芽孢菌進行復活培養；

（5）通過分子生物學方法檢測復活的芽孢菌菌群。

本發明所述油藏為不同地質條件、不同開采方法的各類油藏。