[發明專利]胃黏膜樣品中幽門螺旋桿菌的化學發光免疫測定法

無效

• 申請號: 201210498364.8
• 申請日: 2012-11-29
• 公開（公告）號: CN102980884A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 奚偉紅;王布強;王京;高淑舫;朱丹丹
• 申請（專利權）人: 江蘇創生生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/569
• 代理公司: 江陰市同盛專利事務所 32210
• 代理人: 唐紉蘭;曾丹

技術領域

本發明涉及一種胃黏膜樣品中幽門螺旋桿菌的化學發光免疫測定法。

背景技術

幽門螺旋桿菌（Helicobacter?pylori?，H.pylori）是一種在人的胃腸道上部發現的細菌，已經發現它與胃十二指腸疾病如消化性潰瘍、胃炎和其它疾病有關。按來源把該細菌屬彎曲桿菌屬，然后根據有關它的超微結構和脂肪酸組分方面更詳細的資料再分在螺桿菌屬。

幽門螺旋桿菌的檢測方法很多，常用方法有：

(1)細菌培養法。該方法是診斷幽門螺旋桿菌的“黃金標準”。該方法能直接證明H.pylori?的存在，無假陽性出現，同時還可作藥敏試驗。對不同菌株作遺傳因子研究。但是，分離培養技術條件較高。且需一定的培養時間，可有假陰性出現，尚未能廣泛開展。

(2)尿素酶試驗。幽門螺旋桿菌能夠產生大量很高活性的尿素酶，而其他細菌罕有如此高的尿素酶活性。基于此原理，多采用pH<6.0，一般情況下試劑顏色不變。如果胃內有H.pylori感染，當標本放人試劑中，H.pylori?所產生的尿素酶則分解尿素產生氨，使pH升高，導致劑酚紅變色-粉紅色。尿素酶試驗方法簡便實用、快速靈敏。能在1分鐘內判斷結果，且鏡檢完后就可及時治療。

(3)組織病理學檢查：方法較多，有HE染色、Warthin-Starry染色、Giemsa染色、石炭酸復紅染色、Gimenez染色、吖啶橙染色、間接免疫光法、相差顯微鏡觀察、無標記抗體PAP染色法、雙特異抗體酶免疫染色法、寡核苷酸探針檢查等方法。以Warthin-Starry染色、Gimenez染色效果最佳而常用。但是該檢測方法繁瑣費時，需要一定的技術，有一定的假陽性。

(4)呼氣試驗。感染H.pylori?的患者口服同位素標記的尿素溶液。則尿素分解后產生的同位素CO2?從肺呼出。

對于已經做胃腸鏡檢查后的所獲得的胃黏膜活檢標本，主要采用快速尿素酶法和病理檢測兩種方法檢查可能存在的幽門螺旋桿菌。一般而言，這兩個檢測方法具有較高的一致性，但是，并不是可以相互取代，仍然有不一致的地方。不一致的原因可有：(1)?H.pylori胃內分布有差異，快速尿素酶法是檢測一塊組織。存在標本取樣能否取到的問題，而病理只是一塊組織幾塊切片，取樣的問題更為突出。(2)尿素酶活性和H.pylori的不一致。雖然H.pylori?能夠產生大量很高活性的尿素酶，而其他細菌罕有如此高尿素酶活性。但是目前發現，抑酸藥物、一些抗菌素等會影響尿素酶試驗，而抑酸藥物有可能為患者服用。(3)pH法，因為其他混雜的尿素酶，顏色判斷的視覺誤差等存在假陽性。(4)病理形態學上可有其他相似的螺桿菌、弧菌等干擾。

免疫學檢測主要是利用抗原和抗體的特異性反應進行檢測的一種手段，我國免疫學的檢測基本歷經了放射免疫法（RIA）、酶聯免疫法（ELISA）和化學發光免疫法（CLIA），化學發光免疫法（Chemiluminescence?Immunoassay，CLIA）是將化學發光或生物發光體系與免疫反應相結合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標記免疫測定技術。其檢測原理與放射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同這處是以發光物質代替放射性核素或酶作為標記物，并藉助其自身的發光強度直接進行測定。化學發光免疫法既具有放射免疫的高靈敏度，又具有酶聯免疫的操作簡便、快速的特點，易于標準化操作，且測試中不使用有害的試劑，試劑保持期長，近年來臨床上已應用于檢測各種激素、腫瘤標志物、藥物及其他微量生物活性物質，但是由于樣本取樣困難等原因很少應用于胃黏膜樣品中幽門螺旋桿菌的檢測，而傳統的對于胃黏膜樣品中幽門螺旋桿菌的檢測不是很可靠，存在一定的假陽性，檢測結果不準確，同時成本高。

發明內容

本發明的目的在于克服上述不足，提供一種成本低廉，檢測結果直觀、準確的胃黏膜樣品中幽門螺旋桿菌的化學發光免疫測定法。

本發明的目的是這樣實現的：

一種胃黏膜樣品中幽門螺旋桿菌的化學發光免疫測定法，包括以下步驟：

（a）制作帶檢測物質的樣品稀釋液

將含有幽門螺旋桿菌的一種胃黏膜樣品懸浮于樣品稀釋液；

（b）?抗體-抗原復合體的形成

把樣品稀釋液中的胃黏膜樣品與抗幽門螺旋桿菌抗原的第一種多克隆抗體接觸以形成抗體-抗原復合體；

（c）把步驟（b）的樣品和步驟（b）所得到的抗體-抗原復合體進行分離；

（d）抗體-抗原-抗體復合體的形成